· ELISA比色法实验显色，是一个酶催化的实验。在一定范围内，环境温度越高，酶活性越强，相同孵育时间内，温度高的，检测数据高。相同温度，孵育时间长的，检测数据高。

· 说明书的标曲只是一个参考用途，展示大概的结果形式。不能直接使用，否则，试剂盒就没有必要提供标准品了，客户直接用说明书的曲线来计算了，对吧。【每次实验，当时都需要做标准曲线，才是最准确的方法】

· 标准曲线是否良好？ 客户可以绘制相应的拟合曲线（线性，或者曲线形式），R2大于0.9以上是可以接受的，0.99那就是非常好，小数点后面9越多越好。

* 试剂盒规格的48或者96，通常代表的是反应次数或者孔的数量。而不是样品数量。（标准品，对照都会参与到反应或者加入到孔中，因此样品数量肯定会少）

试剂盒做一次实验，需要客户做：6个标准品（标准品数量，根据各个说明书里面说的来设置，6个浓度点）+ 一个空白孔（标准含量为0） = 7。通常每个实验都要做复孔（最少2个复孔，也有做3个复孔的。2个复孔意味着1个东西，需要加到2个孔，统计学需求，算平均值等），这么一来被占用的孔就是7*2=14个孔。96-14=82个孔，只有这82个孔可以给客户拿去测试他的样品。如果也算是复孔，那么就是82/2=41个样品。这是最多可以测试多少样品。

总结：

【2个复孔】样品数量= [ 96 - （标准品数量+对照组数量）*2] / 2

【3个复孔】样品数量= [ 96 - （标准品数量+对照组数量）*3] / 3

#强调#：标准品的数量，阳性对照，阴性对照 的设置，根据说明书来，有些试剂盒是没有阳性对照的。

以上为一次性将试剂盒用完的样品数量。如果客户要做2次实验，需要绘制2次标曲。对应的，继续相减。

1. 主要涉及ATP类的试剂盒，消耗能量ATP，发光（萤火虫）。

2. 主要的实验：荧光素酶分析实验。

使用仪器：

1. 化学发光仪，

2. 光度计（Luminometer），

3. 多功能酶标仪（含化学发光，生物发光检测模块）。

1.试剂盒使用前，通常需要在室温下平衡30-60min。(温度对酶催化反应有影响）。

2.洗板时需保证微孔板平放，将洗涤液注满各孔，但尽量避免漏液溢液，以每孔300 µl为宜；板洗次数一般为3次，要保证洗板的浸泡时间，每次浸泡时间一般为30-60 秒；尽量减少洗液残留量，推荐每次洗板后进行拍板，并及时更换吸水纸，避免吸水纸的碎屑粘到反应孔内。

比色法：特定波长光穿透样品，光被吸收的情况。（酶标仪）（分光光度计）

荧光法：特定波长光，激发染料，发出其它波长光的情况。（荧光/多功能，酶标仪）