Norgen Biotek细胞质RNA和细胞核RNA实验操作指南

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细胞质和细胞核RNA提取试剂盒

Cytoplasmic & Nuclear RNA Purification Kit

货号：21000

悬浮细胞和被提起悬浮的细胞（For cells growing in suspension and lifted cells）

00:00~00:56

• 您好，您正在收看Norgen Biotek。今天，我们将提供有关细胞质和细胞核RNA纯化试剂盒（产品货号：21000）的分步工作流程的教程，该教程适用于在悬浮细胞和被提起悬浮的细胞。

• 为了避免样品污染，建议在开始前先用1%的漂白剂消毒工作区域和仪器，然后70%乙醇擦拭。

• 您的试剂盒包括：详细的产品说明书，Lysis Buffer J（裂解缓冲液J），Buffer SK（缓冲液SK），Wash Solution A（洗涤液A），Elution Buffer E（洗脱液E），Spin Columns（离心柱），Collection Tubes（收集管）和1.7 mL Elution tubes（1.7 mL洗脱管）。

• 在开始前，确保把Lysis Buffer J放在-20℃的冰箱中10到15分钟，并在使用前取出。这是为了确保细胞质和细胞核RNA的分离。

00:58

第1步：细胞组分的制备

Step 1: Cell Fractions Preparation

01:02~02:55

1. 将细胞悬液转移至无RNase的试管，并以不超过200 g或2000 RPM的速度离心10分钟以沉淀细胞。01:16~01:23

2. 小心倒出上清液。为了确保沉淀物不会脱落，可能会在沉淀物中留下几微升的培养基。

3. 在沉淀中加入200 uL冰冷的Lysis Buffer J。

4. 通过涡旋15秒来裂解细胞。在进行下一步之前，请确保整个沉淀完全溶解。使用移液器将裂解液转移至无RNase的微量离心管。

5. 在台式离心机中以最大速度旋转裂解液10分钟。

6. 使用带有小枪头的移液器，将包含细胞质RNA的上清液转移至另一个无RNase的试管。

7. 细胞核RNA组分（沉淀）非常粘稠，可能很松散，因此，强烈建议使用较小的移液器枪头来转移细胞质部分，避免将细胞核RNA组分（沉淀）移出或转移到细胞质部分中。

8. 如果需要提取细胞核RNA，则保留含有细胞核RNA的沉淀。

9. 为了确保沉淀微球不被移出，可以在沉淀物中留下几微升的Lysis Buffer J。立即继续执行步骤2。

02:58

第2A步：将细胞质RNA与柱结合

Step 2A: Binding Cytoplasmic RNA to Column

03:02~03:43

1. 向前一步的上清液（细胞质RNA组分）中加入200 ?L Buffer SK。涡旋混合10秒钟。

2. 向混合物中加入200 uL 96-100％乙醇。涡旋混合10秒钟。

3. 将混合物加到已与收集管组装在一起的离心柱上，并以3500 g或6000 RPM离心1分钟。

4. 丢弃流通液，重新组装离心柱及其收集管。

03:45

第2B步：将细胞核RNA与柱结合

Step 2B: Binding Nuclear RNA to Column

03:48~04:27

1. 将400 uL Buffer SK添加到沉淀（细胞核RNA组分）中。涡旋混合10秒钟。

2. 向混合物中加入200 uL 96-100％乙醇。涡旋混合10秒钟。

3. 将混合物加到已与收集管组装在一起的第二个离心柱上，并以3500 g或6000 RPM离心1分钟。

4. 丢弃流通液，重新组装离心柱及其收集管。

04:29

第3步：柱洗

Step 3: Column Wash

04:32~05:04

1. 将400μL Wash Solution A加入离心柱并离心1分钟。

2. 丢弃流通液。重复这一步骤两次，总共洗三次。

3. 旋转离心柱2分钟，以彻底干燥树脂。丢弃收集管。

05:06

第4步：RNA洗脱

Step 4: RNA Elution

05:08~05:33

1. 将离心柱放入试剂盒中提供的新的1.7 mL洗脱管中。将50 uL Elution Buffer E加到离心柱中。

2. 以200 g或2000 RPM离心2分钟，然后以14000 g或14000 RPM离心1分钟。

05:36

第5步：RNA的保存

Step 5: Storage of RNA

05:39~05:49

纯化的RNA样品可以在–20°C下保存几天。建议样品应置于–70°C进行长期保存。

感谢您观看本教程，希望这个操作指南能够帮助到大家，如果你喜欢这个视频，欢迎大家踊跃分享它。