内在或外在因子 Xase 复合物激活酶原 X 因子会产生活性丝氨酸蛋白酶因子 Xa。 X 因子的激活需要重链的蛋白水解裂解,导致激活糖肽的释放。 Xa因子的重链区含有丝氨酸蛋白酶催化结构域,而轻链与酶原一样,含有膜结合域。Xa因子参与凝血酶原酶复合物,催化凝血酶原快速转化为凝血酶。 凝血酶原是一种酶复合物,由 Xa 因子(酶)和 Va 因子(辅助因子)组成,在钙离子存在的情况下聚集在细胞表面。 尽管因子 Xa 可以独立催化凝血酶原的激活,但随着凝血酶原复合物的完全组装,该反应发生的速率增加了近 300,000 倍。 Xa 因子在体内的凝血活性通过辅因子 Va 因子的失活或在凝血酶原酶复合物解体后通过抑制剂(例如 ATIII)直接抑制 Xa 因子而终止。 近年来,分子生物学家利用因子 Xa 用于细菌中表达的融合蛋白的位点特异性切割。 在目标重组蛋白和促进纯化和/或表达的肽或蛋白质之间掺入因子 Xa 敏感位点。 靶蛋白通过 Xa 因子裂解从表达的杂交体中释放出来。 然后可以通过亲和层析轻松去除 Xa 因子。Xa 因子是通过用从 Rus sell 的毒蛇毒液中分离出来的 X 因子激活剂激活纯化的 X 因子来制备的。 通过在苯甲脒琼脂糖凝胶上层析然后凝胶过滤,从活化混合物中纯化因子 Xa。 也可获得几种改良形式的 Xa 因子,包括: B) b-Xa因子; 和 C) 人 Gla-domainless b-因子 Xa。 标准酶以 50% (vol/vol) 甘油/H2O 的形式提供,应储存在 -20°C 下。 通过 SDS-PAGE 分析确定纯度,并在因子 Xa 凝血测定和/或显色底物测定中测量活性。