MolBoolean 揭开细胞和组织中蛋白质与蛋白质相互作用的秘密

MolBoolean 是Atlas Antibodies开发的一种新型原位接近技术，可以同时检测两种蛋白质目标的游离和相互作用部分，于2024年10月1日全新上市！

产品描述

MolBoolean Mouse/Rabbit（货号：ATL-MolB00001 ） 是一种用于组织和细胞中原位蛋白质邻近分析的试剂盒。MolBoolean 分析利用专有的寡核苷酸设置，能够同时检测两种目标蛋白质（蛋白 A、蛋白 B 和相互作用蛋白 AB）的游离和相互作用（~40 nm 邻近）组分。

MolBoolean 小鼠/兔应使用用户选择的一抗（在小鼠和兔中产生）进行。MolBoolean 依靠抗小鼠和抗兔次级接近探针和滚环放大 （RCA） 作为放大信号的手段。

在 MolBoolean 分析中执行的一系列分子步骤将信息整合到扩增产物中，表明抗体靶标与相互作用蛋白的结合。该信息通过检测报告基因的结合转换为荧光信号，从而可以在常规荧光显微镜上进行可视化。提供图像分析软件来分割和区分荧光信号，从而能够相对定量样品中两个分析蛋白质靶标的游离组分与相互作用组分。

MolBoolean 试剂盒包含15个独立的试管。试剂盒体积为4.8 ml，可在细胞中进行约120次检测(40 μl/assay)，在组织中进行约60次检测(80 μl/assay)。

为什么选择MolBoolean ?

通过同时检测自由和相互作用的蛋白质，完成蛋白质相互作用的空间定量分析。

通过相互作用数据归一化到总目标蛋白水平的精确定量。

无需工程蛋白表达的生物学相关数据。

通过滚动圈放大，荧光信号增加1000倍，允许检测和定量低丰度蛋白质。

适应不同的研究需求。

通用试剂盒，可用于客户选择的一抗。

在细胞和组织中验证。

MolBoolean^TM与普通蛋白检测方法的比较

检测步骤：

MolBoolean 检测包括七个步骤来检测蛋白质是相互作用还是单独存在

1.Proximity Probe Binding：探针与一抗结合。

2.探针臂杂交：探针臂与 DNA 环寡核苷酸杂交。

3.DNA 切口：在 DNA 中引入缺口以进行进一步处理。

4.标签寡核苷酸掺入：将标记的寡核苷酸掺入 DNA 中。

5.DNA 连接：DNA 末端的连接。

6.Rolling Circle Amplification：扩增环状 DNA 以增强信号。

7.检测：结果的可视化和分析。

试剂盒成分：

*使用前，将Tween-20加入Diluent (1x) (tube 2) 至终浓度为0.1% (v/v) 制备“完全稀释剂”

在10ml TBS中加入0.2 ml Tween-20，制备2% (v/v)的Tween-20中间溶液。用玻璃烧杯和磁力搅拌器搅拌10分钟。

用Diluent (1x)  (e.g. 25 ul of 2 % Tween-20 intermediate to 475 ul Diluent)稀释得到最终的完全稀释液。将完全稀释液保存在4°C，并在1周内使用。

试剂盒运输及储存：

MolBoolean 小鼠/兔试剂盒可在固定细胞和FFPE组织样本中进行MolBoolean分析。试剂盒体积，4.8 ml总工作体积，足以在细胞中进行大约120次检测(40ul/assay)，在组织中进行60次检测(80ul/assay)。40?l的测定体积应足以覆盖1 cm2的样品面积。相应地调整以匹配您的实验设置。

MolBoolean试剂盒包含15个独立的试剂盒管，这个工具箱是用干冰运输的。收到后，将所有试剂保存在-20°C。Diluent (1x) 也可以在4°C下保存长达6个月。

关于MolBoolean:

克服原位聚乳酸限制

与原位聚乳酸等传统方法相比，MolBoolean 具有多种优势，可解决数据解释中的关键空白，并提供更多信息

数据规范化

与MolBoolean，蛋白质相互作用的数量可以归一化为目标蛋白质的总数。这是至关重要的，因为靶蛋白水平可以受到各种因素的影响，如细胞治疗或疾病状态。通过提供标准化的测量，MolBoolean 允许更准确的样本之间的比较。

相互作用和非相互作用的检测

分数:与传统方法不同，MolBoolean?可以检测细胞和组织中两种蛋白靶标的非相互作用内源性组分及相互作用。更全面的检测能力增加了可以从实验中提取的空间信息，使研究人员能够确定蛋白质相互作用的位置。

一致的分子过程

滚动循环产品(rcp)源于自由或相互作用的蛋白质是通过相同的分子过程步骤产生的。这确保了均匀的信号效率，减少了数据分析过程中的不确定性。

总体而言，MolBoolean 为检测蛋白质相互作用提供了更可靠、更全面的解决方案，解决了数据解释中的关键空白，并为研究人员提供了更准确的细胞和组织中分子相互作用的见解。

MolBoolean 分析MCF7细胞中E-cadherin(品红色)和β-catenin(绿色)之间的相互作用，使用anti-CDH1 (Cat：ATL-AMAb90862)和anti-CTNNB1 (Cat：ATL-HPA029159)来自Atlas Antibodies AB。图像显示了自由与相互作用蛋白组分的相对定量，通过在一个或两个荧光通道中检测滚动环产物(RCPs)来表示:32%的游离E-cadherin(品红)，19%的游离β-catenin(绿色)，和49% E-cadherin/β-catenin复合物(白色)。数据归一化为总目标蛋白水平(总RCPs)。