重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物

取 100ul感受态细胞于冰浴上融化

挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2ml SOB 培养液中，37℃摇床过夜

连接前先电泳确定待连接载体与片段的浓度

酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套 Buffer

加入 1/10 体积的乙酸钠（3 mol?L，PH=5.2）于 DNA 溶液中充分混匀，使其最终浓度为 0.3 mol?L

此方法适用于小量质粒DNA 的提取提取的质粒 DNA 可直接用于酶切PCR扩增 。

琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到 EP 管中，称琼脂糖带的重量；2. 按照每100mg 加 400?l 的量加入binding buffer，放入到 EP管振荡器中，45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都

1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架
好梳子；

PCR 反应管中调制反应液

实验室常用 DNA 聚合酶有三种： TaKaRa TaqTM，TaKaRa EXTaqTM 和Pyrobest TMDNA Polymerase。TaKaRa TaqTM 是一般的 DNA 聚合酶，保真性较差 ，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRa EXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐热性 DNA 聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的 PCR 产物 3’端附有一个 “A”碱基，如果希望直接将产物克隆 到 T-vector 可以用此酶。Pyrobest TM DNA

介绍组蛋白印迹的操作详细流程。