组蛋白有四种类型：H2A、H2B、H3、H4，组蛋白是染色体基本结构蛋白，因富含碱性氨基酸 Arg 和 Lys 而呈碱性，可与酸性的 DNA 紧密结合。因为组蛋白是偏碱性的，因此我们可以使用酸法

在收集到生物材料之后，最好能即刻进行 RNA 制备工作。若需暂时储存，
则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备 RNA 时，将储
存于冷冻柜的材料取出

1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml的水中。加热至 37℃溶解之，补加水至终体积为 100ml。用滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0，置棕色瓶中保存于室温。

双向电泳常用溶液配方

聚丙烯酰胺凝胶的配制

1 蛋白质序列的检索
1.1 从 NCBI 检索蛋白质序列
http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Protein

一般来说,利用质谱数据鉴定蛋白质主要有两种方法:肽质量指纹图谱（PMF）和肽序列标签分析（sequence tag analysis）。这两种方法较传统的 N 端测序或内部 Edman 测序法敏感数百倍，其检测低限为飞摩尔（fmol）水平（如银染的 2D胶点或 1D 胶带）。

将 CBB 溶于甲醇中并不停的搅拌 15min。加入乙酸与 ddH2O

样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响 2-DE 结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则：1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；2）减少对蛋白质的人为修饰；3）破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。

收集细胞。将培养瓶置于冰上，倒掉培养基，用PBS 或生理盐水漂洗两次，留适量液体于瓶内，然后用特制的细胞刮棒朝一个方向刮取细胞。将细胞悬液转移到离心管，离心取沉淀，-800C 保存。（收集细胞要迅 速 ，

杂交时，为确认蛋白是否转至PVDF膜上，可用下列方法对膜上蛋白进行可逆性染色。

样品制备
电泳分离
蛋白的膜转移
免疫杂交与显色――蛋白检测