蛋白质印迹手册之一：膜的选择

了解过Western印迹实验得都知道PVDF膜和NC膜作为应用中最常用的两种类型的膜，那大家该如何选择？各有什么特点？其中PVDF膜市面上常见的也有三种。这三种膜有何不同，分别适合哪些应用呢？

Part 1：膜的选择

蛋白印迹所使用的膜的类型可能影响下列因素：

? 蛋白质结合能力

? 是否需要用醇预湿

? 开展多次剥离（stripping）和再生检测（reprobing）实验的能力

? 蛋白质观察

? 长期印迹保存

? 信噪比

聚偏二氟乙烯（PVDF）和硝酸纤维素是Western印迹应用中最常用的两种类型的膜。

与硝酸纤维素膜相比，电转到PVDF膜上有许多优点。PVDF膜可提供更好的蛋白质截留率、物理强度和广泛的化学兼容性（Pluskal等，1986）。其中更高的机械强度和出色的耐化学性让PVDF膜成为免疫检测中各种染色应用和二次检测的理想选择。使用PVDF膜的另一个优点是，单块凝胶上的平行重复泳道可用于各种应用中，如考马斯蓝染色，接着切割条带进行N端测序，蛋白质水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测（Kurien等，2003）。市售的硝酸纤维素膜的典型结合能力是80 – 100 μg/cm2，而PVDF膜的结合能力是100 – 200 μg/cm2。

在检测血清中人免疫缺陷病毒（HIV）时直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，结果表明，PVDF膜有着更好的总体HIV抗原截留率，并且有助于改善提高抗体对糖基化包膜抗原的检测。硝酸纤维素膜和PVDF膜的特性比较详见表1。

表1. PVDF和硝酸纤维素膜特性及应用的比较。

PVDF转印膜

常见的三种PVDF膜：0.45 μm P膜、0.2 μm PSQ膜、0.45 μmFL膜

0.45 μm P膜是一种通用的基质，适用于一般的免疫印迹应用。

0.2 μm PSQ膜适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。

0.45 μmFL膜是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。

以下提供各种PVDF转印膜的性质，详见表2。

表2. PVDF转印膜的性质和应用。

看以上介绍大家可根据实验需求来选择所需要的膜~