总RNA的提取（ Trizol 法提取 ）

在收集到生物材料之后，最好能即刻进行 RNA 制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备 RNA 时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻 ，以避免 RNase 的作用。

1.提取组织 RNA 时，每50～100mg 组织用 1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提取细胞 RNA 时，先离心沉淀细胞，每 5-10 ╳106 个细胞加 1ml Trizol 后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；

       2.将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置 5 分钟 ；

3. 在上述 EP 管中，按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿，盖上 EP管盖子，在手中用力震荡 15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置 2～3 分钟后，
12000g（2℃～8℃）离心 15 分钟；

4. 取上层水相置于新 EP管中,按照每 1ml TRIZOL加 0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置 10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心 10 分钟 ；

5.弃上清 ，按照每 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇进 行洗涤，涡 旋混合，7500g（2℃～8℃）离心 5 分钟，弃上清；

6. 让沉淀的 RNA 在室温下自然干燥；

7.用 Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀。