缓冲液和储备溶液

PBS，三乙醇胺缓冲液(TBS) 和三乙醇胺-吐温(TBS Tween) 缓冲液的配制

PBS (10x)

80g 氯化钠

2.0g 氯化钾

14.4g 磷酸氢二钠

2.4g 磷酸二氢钾

加入800ml 超纯水，混匀，用纯盐酸调节pH 值至7.4，然后加入超纯水至1L。

10倍三乙醇胺缓冲液

24.23g 氨基丁三醇氯化氢

80.06g 氯化钠

加入800ml 超纯水，混匀，用纯盐酸调节pH 值至7.6，然后加入超纯水至1L。

三乙醇胺-吐温缓冲液（含0.1% 的吐温20）

配制1L 溶液：取100ml 10 倍三乙醇胺缓冲液加890ml 超纯水，再加入10ml 吐温20 (10%)

吐温20 很粘稠会粘在量取的枪头上，要确定加入三乙醇胺缓冲液的变性剂体积足够。建议使用10% 的溶液进行配制，这样会比用未稀释
的吐温20 溶液容易配制。

蛋白质印迹

裂解液

这些缓冲液可保存于4°C 几周，分装后冻存于-20°C 可以保存一年。

乙基苯基聚乙二醇（NP-40）缓冲液

150mM 氯化钠

1.0% 乙基苯基聚乙二醇（也可用0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100) 代替）

50mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢(Tris-HCl)，pH 值8.0

蛋白酶抑制剂

RIPA缓冲液（放射免疫沉淀测定缓冲液）

150mM 氯化钠

1.0% 乙基苯基聚乙二醇或0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚

0.5% 去氧胆酸钠

0.1% SDS（十二烷基硫酸钠）

50mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢，pH 值8.0

蛋白酶抑制剂

RIPA 缓冲液的变性能力要强于乙基苯基聚乙二醇或聚乙二醇辛基苯基醚，因其活性成分包含了离子型去垢剂SDS 和去氧胆酸钠，在核膜降解和细胞核提取时非常有用。RIPA 缓冲液产生的背景很低，但其也可使蛋白酶变性。

10% 的去氧胆酸钠储存液（5 克溶于50ml）必须避光保存。

三羟甲基氨基甲烷-氯化氢缓冲液

20mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢，pH 值7.5

蛋白酶抑制剂

三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液（用于细胞骨架蛋白）

10mM 三羟甲基氨基甲烷，pH 值7.4

100mM 氯化钠

1mM 乙二胺四乙酸

1mM 乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸

1% 聚乙二醇辛基苯基醚

10% 甘油

0.1% 十二烷基硫酸钠

0.5% 去氧胆酸钠

蛋白酶抑制剂

10% 的去氧胆酸钠储存液（5 克溶于50ml）必须避光保存。

非变性裂解缓冲液

20mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢，pH 值8.0

137mM 氯化钠

10% 甘油

1% 乙基苯基聚乙二醇/聚乙二醇辛基苯基醚

2mM 乙二胺四乙酸

蛋白酶抑制剂

（用于可溶于变性剂的抗原，其天然型被相应抗体识别。聚乙二醇辛基苯基醚可替代乙基苯基聚乙二醇无去垢剂型可溶蛋白裂解液）

5mM 乙二胺四乙酸

0.02% 叠氮化纳

磷酸盐缓冲液

蛋白酶抑制剂

一些可溶性蛋白不需要使用去垢剂。此缓冲液可用于机械裂解细胞，如用注射器反复抽压或用Dounce 匀浆机匀浆。

变性裂解液/用于不容于去垢剂的抗原的裂解液

1% 十二烷基硫酸钠

5mM 乙二胺四乙酸

使用前加入：

10mM 的二硫苏糖醇或β-巯基乙醇

蛋白酶抑制剂

15U/ml DNA 酶I

仅识别变性蛋白的抗体不会与天然型蛋白结合。在收集和裂解细胞时，要将重悬细胞的变性裂解缓冲液加热。此方法也可用于非离子型去垢剂无法提取的抗原。使用DNA 酶I 有助于从染色质中抽提蛋白。

电泳和印迹缓冲液

Laemmli 2 倍缓冲液/上样缓冲液

4% 十二烷基硫酸钠

10% 2-巯基乙醇

20% 甘油

0.004% 溴酚蓝

0.125M 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢

测定pH 值，调整pH 值至6.8

电泳缓冲液

25mM 三羟甲基氨基甲烷碱

190mM 甘氨酸

0.1% 十二烷基硫酸钠

测定pH值，如有必要的话，调整pH 值至8.3

转移缓冲液（湿式）

25mM 三羟甲基氨基甲烷碱

190mM 甘氨酸

20% 甲醇

如有必要的话，pH 值应调节至8.3

大于80 kDa 的蛋白，建议十二烷基硫酸钠终浓度为0.1%。

转移缓冲液（半干式）

48mM 三羟甲基氨基甲烷

39mM 甘氨酸

20% 甲醇

0.04% 十二烷基硫酸钠

封闭缓冲液

5% 牛奶或BSA（牛血清白蛋白）

加入三乙醇胺-吐温缓冲液。充分混合后过滤。如不过滤会聚集成斑点，这种小暗点会在显色时影响印迹的效果。