分子生物学常用溶液配制

一、分子生物学常用贮存液的配制

1．30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml的水中。加热至 37℃溶解之，补加水至终体积为 100ml。用滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0，置棕色瓶中保存于室温。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

 2．40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g 丙烯酰胺（DNA 测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L。

【注意】见上述配制 30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定 。

3．放线菌素D溶液

【配制方法】把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中，1:10 稀释贮存液，用 100%乙醇作空白对照读取 OD440 值。放线菌素 D（分子量为 1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21，900，故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处的吸光值为 0.182，放线菌素 D 的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。

【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在 440nm 波长处的光吸收确定放线菌素 D 的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。

4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液

【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP,用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0，用蒸馏水定容 1ml，分装成小份保存于-70℃

5．10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中，加水定容至 1L 后过滤除菌。

6．10%过硫酸铵溶液

【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中，该溶液可在 4℃保存数周。

7．BCIP溶液

【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于 10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于 4℃

8．2×BES缓冲盐溶液

【配制方法】用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4，室温下用 HCl 调节该溶液的pH 值至 6.96、然后加入蒸馏水定容至 100ml，用 0.22μm 滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。

9．1mol/LCaCl2溶液

【配制方法】在200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl2·6H2O，用0.22μm 滤器过滤除菌，分装成 10ml 小份贮存于-20℃。

【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至 100ml，用 Nalgene滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，然后骤冷至 0℃。

10．2.5mol/LCaCl222溶液

【配制方法】在 20ml 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2·6H2O，用 0.22μm 滤器过滤除菌 ，分装成 1ml 小份贮存于-20℃。

11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液

【配制方法】用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH5.2）溶解 3.09g DTT，过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于-20℃。

【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。

12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液

【配制方法】把每一种 dNTP 溶解于水至浓度各为 100mmol/L 左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris 碱分别调节每一dNTP溶液的pH 值 7 .0（用 pH 试纸检测 ），把中和后的每种 dNTP 溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种 dNTP 的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为 50mmol/L 的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。比色杯光径为 1cm 时,吸光度=εM

13．0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液

【配制方法】在800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0（约需 20g NaOH颗粒）然后定容至 1L，分装后高压灭菌备用。

【注意】EDTA 二钠盐需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0,才能完全溶解。

14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）

【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。

15．2×HEPES缓冲盐溶液

【配制方法】用总量为 90ml 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES，用 0.5mol/l NaOH 调节 pH 值至 7.05，再用蒸馏水定容至 100ml。用 0.22μm 滤器过滤除菌，分装成 5ml 小份，贮存于-20℃。

16．IPTG溶液

【配制方法】IPTG 为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为 238.3），在 8ml 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏水定容至 10ml，用 0.22μm 滤器过滤除菌，分装成 1ml 小份贮存于-20℃。

17．1mol/L乙酸镁溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸镁，用水定容至 1L 过滤除菌。

18．1mol/LMgCl2溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至 1L，分装成小份并高压灭菌备用。

【注意】MgCl2 极易潮解，应选购小瓶（如 100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放 。

19．β-巯基乙醇（BME）溶液

【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L 溶液，应装在棕色瓶中保存于 4℃。

【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理。

20.NBT溶液

【配制方法】把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

21．酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的 0.01mol/l Tris·HCl(pH=7.6)液层,保存于 4℃。

【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液

【配制方法】用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液（100mmol/L）。

【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF 污染的衣物应予丢弃。

PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随 pH 值的升高而加快，且 25℃的失活速率高于 4℃。pH 值为 8.0 时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为 85min，这表明将 PMSF 溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液

【配制方法】在800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24gKH2PO4,用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L，在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌 20min。保存于室温。

24．1mol/L乙酸钾（pH=7.5）溶液

【配制方法】将 9.82g 乙酸钾溶解于 90ml 纯水中，用 2mol/L 乙酸调节 pH 值至7.5 后加入纯水定容到 1L，保存于-20℃。

25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）

【配制方法】在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水，即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。

26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液

【配制方法】在 80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH 值至 5.2或用稀乙酸调节 pH 值至 7.0，加水定容到 1L，分装后高压灭菌。

27．5mol/LNaCl溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L，分装后高压灭菌。

28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液

【配制方法】在 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS，加热至 68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的 pH 值至 7.2，加水定容至 1L，分装备用。

【注意】SDS 的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的 SDS，10%SDS 溶液无须灭菌。

29．20×SSC溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠，加入数滴 10mol/lNaOH 溶液调节 pH 值至 7.0，加水定容至 1L，分装后高压灭菌。

30．20×SSPE溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA,用 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.4（约需 6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至 1L,分装后高压灭菌。

31．100%三氯乙酸溶液

【配制方法】在装有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水，形成的溶液含有 100%（M/V）TCA。

32．1mol/LTris溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 121.91g Tris 碱,加入浓 HCl 调节 pH 值至所需值 。pHHCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值，加水定容至 1L，分装后高压灭菌。

【注意】如 1mol/L 溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的 Tris。尽管多种类型的电极均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris 溶液的 pH 值因温度而异，温度每升高 1℃，pH 值大约降低 0.03 个单位。例如：0.05mol/L 的溶液在 5℃、25℃、和 37℃时的 pH 值分别为 9.5、8.9 和 8.6。

33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/lTris）

【配制方法】在800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 碱，加入 0.015g酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4，用蒸馏水定容至 1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min，于室温保存。

34．X-gal溶液

【配制方法】X-gal 为 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D 半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解 X-gal 配制成的20mg/ml 的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有 X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal 溶液无须过滤除菌。

二、常用抗生素溶液

a：以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB 培养基）。

三、常用的电泳缓冲液