免疫沉淀—如何用IgM 抗体进行

用IgM 抗体进行免疫沉淀

由于IgM 抗体的五聚体结构，所以很难用于免疫沉淀实验。IgM 抗体还不能很好地结合蛋白A 或蛋白G。有两种方法可供选择：

a 蛋白L 珠子

蛋白L是一个36 kDa 的免疫球蛋白结合蛋白，可从大消化链球菌纯化。蛋白L 可以结合抗体的轻链（而蛋白A 和G 结合抗体重链的Fc 段）。

蛋白L 比蛋白A 或G 结合抗体类型范围更广泛，因为重链的任何一部分都不参与结合相互作用。它能够结合所有抗体类型，包括IgG、IgM、IgA、IgE 及IgD。单链可变区段（ScFv）和Fab 片段也能结合蛋白L。

蛋白L 仅限于结合那些含有kappa(κ) 轻链（即VL 功能区）的免疫球蛋白。在人类和小鼠中，以kappa (κ) 轻链为主。其余的免疫球蛋白有lambda(λ) 轻链，它不结合蛋白L。此外，蛋白L 仅能有效结合kappa 轻链的某些亚型。例如，它结合人类VκI、VκIII 和VκIV 亚型，但不结合VκII 亚型。对于小鼠，仅限于结合那些具有VκI 轻链的免疫球蛋白。

利用蛋白L有几个优势：

1.蛋白L 不能结合牛、绵羊或山羊的抗体，因此非常适合从含牛血清的细胞培养液中纯化小鼠IgM。

2.蛋白L 可以结合多种动物来源抗体的kappa 轻链而不干扰抗原结合位点，因此非常适用于用IgM 抗体的免疫沉淀。

3. 它能结合所有类别的免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA、IgE 及IgD），因此对IgM 纯化特别有用，因为IgM 不能用蛋白A 或G 纯化。