PVDF 膜上蛋白的可逆染色

Western

杂交时，为确认蛋白是否转至PVDF膜上，可用下列方法对膜上蛋白进行可逆性染色。

1.氨基黑染色

染液：0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid.

染色：将 PVDF 膜置于染液中染色数钟，ddH2O 脱色。

2.考马氏亮蓝染色

染液：0.1% Coomassie Brilliant Blue R-250 (w/v) and 50% methanol (v/v)

脱色液：40% methanol (v/v) with 10% acetic acid (v/v)

染色：将 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.，脱色液脱色。

3．丽春红染色PonceauS

染液：0.2%w/vPonceauSininTCA(3%v/v)

染色：将 PVDF膜置于染液中染色 5min

脱色：ddH2O脱色

三、银染

PAGE 胶上蛋白质的银染方法有数百种，其原理相似，具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色，呈“爆炸性”反应模式，用于蛋白定量时准确性差，但其敏感度高、简便易行，仍被广泛应用。下面列举的这三种方法为常用的双向电泳凝胶染色法，可与质谱兼容。其中方法 1 敏感性最高，方法 3 背景最低 、
对比度好。

注意事项：

1.应严格按照操作步骤进行；

2.显色前最好更换新染色盘；

3.显色时变为黄色或棕色后立即弃去，更换新鲜显色液，一般来说染一块胶应配制 500ml 染液。更换 2-3 次；

4.市售甲醛的浓度为 37%；

5.三种方法均与质谱兼容，Blum 法敏感性高，但背景呈淡黄色，EMBL法次之但背景较低，染色点较黑。Vorum 相对不敏感，但背景清晰，信噪比高。