固定缓冲液
福尔马林(10%,中性缓冲液)
3.7-4% 甲醛(37-40%)
33mM 磷酸二氢钠
46mM 磷酸氢二钠(无水)
多聚甲醛(4%,中性缓冲液)
8% 的多聚甲醛
0.2M 磷酸盐缓冲液(PBS),pH值7.4
53mM 磷酸二氢钠
154mM 磷酸氢二钠
8% 多聚甲醛溶液配制时应60°C 加热搅拌(温度不要超过60°C)。溶液达到60°C 时多聚甲醛溶解,加入500ml 0.2mM 磷酸盐缓冲液,使0.1mM 磷酸盐缓冲液中含4% 多聚甲醛。小心滴加1 当量的氢氧化钠溶液直至溶液澄清(每500ml 滴加1 至2 滴;如果仍未澄清,可继续滴加。或者,可在1 至2L 溶液中加入2 粒固体氢氧化钠)。溶液变冷后过滤。
溶液的pH 值应为7.4。不要用酸或碱来调节pH 值!如需要调节,可另配制0.2 M 溶液来调节,溶液可使用单碱或双碱的磷酸钠配制(视实际情况而定)。
(多聚甲醛应新鲜配制。如4°C 过夜保存,第二天使用固定效果不如当天配制的好。可以将多聚甲醛溶液-20°C 冻存,但为了结果的一致性,组织样本要么都用新鲜配制的多聚甲醛固定,要么都用新鲜融解的多聚甲醛固定。)
Bouin 溶液(特别用于保存质地软、结构精细的组织,如脑组织)
75ml 苦味酸(饱和的)
25ml 甲醛(37-40%)
5ml 冰乙酸
充分混合
抗原修复液
柠檬酸钠缓冲液,pH 值6.0
10mM 柠檬酸钠(二水枸橼酸三钠)
0.05% 吐温20
混合溶解枸橼酸钠,用1N 盐酸调节pH 值至6.0。
加入吐温20 并充分混合。
室温可保存3 个月,置于4°C 可保存更长时间。
三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸缓冲液,pH 值9.0
10mM 三羟甲基氨基甲烷碱
1mM 乙二胺四乙酸
0.05% 吐温20
混合溶解,调节pH 值至9.0。加入吐温20 并充分混合。
室温可保存3 个月,置于4°C 可保存更长时间。
含酶的抗原修改缓冲液:
胰蛋白酶储液
0.5% 胰蛋白酶
蒸馏水融解后-20°C 冻存。
氯化钙储存液(1%)
1% 氯化钙
蒸馏水融解后4°C 保存。
胰蛋白酶工作液
0.05% 胰蛋白酶(用0.5% 胰蛋白酶储存液配制)
0.1% 氯化钙(用1% 氯化钙储存液配制)
8ml 蒸馏水
蒸馏水融解,用1M 氢氧化钠调节pH 值至7.8
4°C 可保存3 个月,置于-20°C 可保存更长时间
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