大肠杆菌质粒 DNA的提取（ 碱裂解法 ）

此方法适用于小量质粒DNA 的提取提取的质粒 DNA 可直接用于酶切PCR扩增 。

1.取 1.5ml 细菌培养物于 EP 管中，4000rpm 离心 1 分钟，弃上清液，使细菌沉淀尽量干燥；

       2. 将细菌沉淀重悬于用冰预冷的 100 ?l 溶液 I (50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/LEDTA pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0) 中，剧烈振荡；

3. 加入 200 ?l 新配制的溶液 II(0.2 mol/L NaOH，1％SDS（m/v）)，盖紧 EP 管口，快速颠倒离心管 5 次，以混合混合物，确保离心管的整个内表面与溶液II 接触，不要涡旋，置于冰浴中；

4. 加入 150 ?l 预冷溶液 III(每 100 ml 的溶液 III 中含 60 ml 5 mol/L 乙酸钾，11.5ml 冰乙酸，28.5 ml H2O)，盖紧 EP 管口，反复颠倒数次，使溶液 III 在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上 3~5 分钟；

5. 在最大转速下离心 5min，取上清液于另一新 EP 管；

6. 用两倍体积的乙醇室温沉淀双链 DNA，振荡混合于室温放置 2 分钟，最大转速离心 5 分钟；

7. 小心吸去上清液，将离心管倒置于滤纸上，以使所有液体都流出，在将附于管壁的液滴除尽；

8. 加 1ml 70％乙醇洗涤沉淀，振荡混合，用 12,000g 离心 2 分钟，弃上清，将开口的 EP 管置于室温使乙醇挥发，直至 EP 管中内没有可见的液体存在（5～10 分钟），用适量的 ddH2O 溶解；

9. 用 0.5?l 的 RNase 37℃温育 5~10 分钟；

10. 电泳鉴定。