细胞&类器官回收液：从水凝胶或动物源细胞外基质中回收细胞&类器官，仅需15min

VitroGel类器官回收溶液是一种即用型、非酶细胞回收溶液，用于快速高效地从VitroGel或基于动物的细胞外基质（ECM）中回收类器官或3D培养的细胞。VitroGel类器官回收溶液在室温下稳定，并具有中性pH值。回收的细胞可以在2D和3D培养中进行亚培养。VitroGel细胞回收溶液可以在水凝胶标本固定和染色制备之前或之后使用，以确保高质量的下游数据分析。VitroGel类器官回收溶液也可用于从2D细胞外基质涂层板中收获细胞。VitroGel类器官回收溶液支持高恢复率和细胞活性，适用于细胞传代、冷冻保存或随后的生化分析中的完整类器官/细胞。

1、回收动物源ECM中的细胞/类器官(如Matrigel, Cultrex, and Geltrex)

方案一 动物源ECM培养的细胞/类器官的回收 

注意：对动物源ECM细胞/类器官回收之前，将VitroGel回收液冷却至4℃以获得z佳效果。

1.从动物源ECM培养板中吸除培养基。

2.向24孔板的每孔中加入1 mL预冷的VitroGel回收液(4°C预冷)。

3.将凝胶和溶液一起转移到15 mL的离心管中。（可选:另加1 mL回收液洗涤培养板，并将其混合到离心管中。） 

4.轻轻上下吹吸5-10次，将离心管放在冰上或放在冰箱中2-5分钟，使ECM分离。（可选:摇晃离心管2-5分钟，而不是移液吹吸。） 

5.4°C,100 x g，离心3-5分钟。 

6.除去上清。细胞应准备好传代或储存。（可选:将类器官分解成更小的碎片，将细胞重悬在培养基中，彻底移液并再次离心。）

注意：由于动物源ECM的蛋白质浓度不同，可能需要将细胞重新悬浮在额外的VitroGel回收液中(重复步骤4至6)，以完全去除ECM。 

方案二 从动物源ECM包被板中回收iPSC

1.从动物源ECM培养板中吸除培养基。 

2.在6孔板的每孔中加入2 mL PBS溶液，洗涤。 

3.在6孔板的每孔中加入1 mL的VitroGel细胞回收液。 

4.室温孵育培养板3-5分钟。（可选:将培养板放入冰箱2-5分钟，加速ECM解离。） 

5.每孔加入1 mL培养基，将细胞悬液转移到15 mL的离心管中。 

6.用1 mL培养基清洗两遍，将培养液混合到离心管中。

7.在4℃，100 x g的条件下离心3-5分钟，回收iPSC。  

2、VitroGel水凝胶系统中回收细胞/类器官示意图

以24孔板为例，以下方案一和方案二的选择取决于细胞和水凝胶的条件，如果水凝胶中的细胞直径大于500 um，建议使用方案一; 如果使用的是高浓度水凝胶(1：0或1：1稀释)或水凝胶中细胞的直径小于500 um，则推荐使用方案二。 

方案一 使用移液管

1.将VitroGel回收液温热至37°C。 

2.将细胞从培养箱中取出，吸除覆盖水凝胶顶部的培养基。用DPBS清洗水凝胶2次。 

3.向孔中加入1 mL温热的VitroGel回收液，并用10 mL移液管轻轻上下吹吸，使水凝胶变成小块，加速水凝胶的溶解。

4.向15 mL离心管中加入5 mL预热的VitroGel回收液，并将水凝胶转移到管中。（可选:用1 mL温热的VitroGel回收液冲洗培养孔，并将溶液混合到离心管中） 

5.使用10 mL的移液管轻轻上下吹吸2-5次，然后将离心管水浴2-3分钟。重复此循环2-3次。(根据凝胶强度和细胞类型，优化移液次数和重复次数) 

6.室温下100 × g离心3-5分钟，收集细胞(根据不同细胞类型，优化离心速度和时间)。（可选:如果细胞颗粒顶部仍有一些水凝胶，用5 mL温热的VitroGel回收液重悬细胞，再重复步骤4至6。）  

方案二 使用实验刮刀

1.将VitroGel回收液温热至37°C。 

2.将细胞从培养箱中取出，吸除覆盖水凝胶顶部的培养基。用DPBS清洗水凝胶2次。 

3.向孔中加入1 mL温热的VitroGel回收液，用刮刀将水凝胶从孔板上分离。 

4.向15 mL离心管中加入5 mL预热的VitroGel回收液，并将水凝胶转移到管中。（可选:用1 mL温热的VitroGel回收液冲洗培养孔，并将溶液混合到离心管中） 

5.摇动离心管20次，然后将离心管水浴2-3分钟。重复这个循环3-5次。(根据凝胶强度和细胞类型，优化摇摆时间和重复次数)。 

6.室温下100 x g离心3-5分钟，收集细胞(根据不同的细胞类型，优化离心机的速度和时间)。（可选:如果细胞颗粒顶部仍有一些水凝胶，用5 mL温热的VitroGel回收液重悬细胞，再次重复步骤5和6。）  案例

使用VitroGel 类器官回收溶液（货号MS04）通过两种不同的方法从Matrigel中回收类器官。 

方法 1：用VitroGel类器官回收液重悬类器官，移液枪将类器官吹打成小片段进行传代培养/扩增。

方法 2：在不使用移液枪的情况下，摇动装有类器官和VitroGel类器官回收液混合物的试管，以获得完整的类器官。 

在这两种情况下，VitroGel类器官回收液都保存在4℃中，以在使用前保持低温。在离心之前，将类器官/基质胶和VitroGel回收液混合物在室温下孵育2分钟。第0天的图像显示了用两种不同方法回收后的类器官的形态。

使用VitroGel类器官回收液从2D Matrigel涂层板回收iPSC

VitroGel类器官回收液可用于从2D Matrigel涂层板回收iPSC细胞。使用前将溶液预热至室温。A) 细胞从Matrigel涂层板上脱离的形态。（加入VitroGel类器官回收液后3分钟），B) 收获细胞后的孔板图像。（显示所有细胞已从Matrigel涂层板上移除），C) 重新接种到新Matrigel涂层板后的细胞形态（第3天）。  

参考文献

1、De Donato, M., Babini, G., Mozzetti, S., Buttarelli, M., Ciucci, A., Arduini, G., De Rosa, M. C., Scambia, G., & Gallo, D. (2020). KLF7: a new candidate biomarker and therapeutic target for high-grade serous ovarian cancer. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 39(1). https://doi.org/10.1186/s13046-020-01775-9 

2、Lan, T., Guo, J., Bai, X., Huang, Z., Wei, Z., Du, G., Yan, G., Weng, L., & Yi, X. (2020). RGD-modified injectable hydrogel maintains islet beta-cell survival and function. Journal of Applied Biomaterials & Functional Materials, 18, 228080002096347. https://doi.org/10.1177/2280800020963473 

3、Powell K. Adding depth to cell culture. Science, 356(6333), 96–98. https://doi.org/10.1126/science.356.6333.96