T淋巴细胞特异性识别抗原后,可被双活化信号刺激后,通过信号转导启动有关基因转录,进而发生增殖,这是淋巴细胞的基本功能,反映了其对抗原的识别和发生免疫应答的能力。而流式细胞术,就是最常用的检测T淋巴细胞活化增殖的方法。
如何使用流式,简单快捷的检测活化的血样中T淋巴细胞的增殖反应呢?
作为专业的流式抗体与解决方案,艾美捷科技,为您推荐流式科研与诊断方案领导者EXBio的T淋巴细胞增殖反应检测试剂盒(T-cell BlastoFlowEx Kit)
T淋巴细胞增殖反应检测试剂盒 | |
T-cell BlastoFlowEx Kit | |
货号:ED7642 | |
规格:100 test | |
反应种属 | 人 |
应用类型 | 流式细胞术,FC |
试剂盒原理 | 该试剂盒使用抗CD3和抗Ki67抗体混合物检测增殖的淋巴细胞。 |
试剂盒组分:
组分 | 名称 | 形式 | 说明 |
ED7642-1 | 固定与裂解液 | 10X浓缩液 | 稀释至1X后,每次实验加2ml |
ED7642-2 | 破膜剂 | 10X浓缩液 | 稀释至1X后,每次实验加0.5ml |
ED7642-3 | EDTA | 即用型 | 每次实验加25ul |
ED7642-4 | CD3 PC/Ki-67 PE抗体预混液 | 即用型 | 每次实验加50ul |
实验流程:
1.从培养箱中取出试管,取下并丢弃管盖。每管中加入25 ul EDTA溶液,混合。
2.在37℃下孵育10分钟。
3.加入2ml的PBS,混合。400g离心细胞5分钟,移除上清液。
4.轻轻摇动管子扰乱沉淀。加入2ml的稀释固定和裂解溶液,混合。室温下孵育10分钟。
5.400g离心细胞5分钟,移除上清液。
6.加入0.5ml稀释的破膜溶液,混合。室温下孵育10分钟。
7.加入2ml的PBS。400g离心细胞5分钟,移除上清液。
8.加入50 ul的CD3/Ki-67 PE抗体预混液,混匀,室温下孵育至少30分钟。
9.加入2ml PBS。400g离心细胞5分钟,移除上清液。
10.用0.1-0.3ml的1%甲醛PBS溶液或者稀释的固定和裂解液(1份固定裂解液液+9份PBS的缓冲液)重悬细胞。在2-8℃下暗室条件下储存处理后的样品,直到分析。
结果展示:
1.用巨细胞病毒 -IE-1蛋白抗原肽体外刺激巨细胞病毒阳性供体全血
2.用巨细胞病毒 pp65抗原肽体外刺激巨细胞病毒阳性供体全血
3.全血在植物血凝素(PHA)管(货号:ED7634)中刺激,用T细胞BlastoFlowEx试剂盒处理并在流式细胞仪中进行分析。 CD3 + /单细胞的目标亚群显示为PE荧光的直方图。根据刺激阴性对照管(货号:ED7637)确定Ki-67阴性峰和Ki-67阳性峰之间的区分线。
【说明性】更加详细的操作指南与分析指南,请点击说明书下载
EXBIO是捷克一家著名的生物试剂公司,专注于流式细胞术配套试剂的开发。自1990年成立以来,EXBIO公司研发和制造的抗体分销全球。目前,EXBIO可提供超过4000种质优、价廉的研究和临床应用抗体,涵盖了血液学,免疫学,癌症,干细胞和细胞生物学等领域,如:CD分子、细胞粘附分子、细胞骨架、凋亡、细胞信号传导、肿瘤标志物、人血型、HLA、生殖等研究用抗体,涉及荧光染料如FITC、PE、PE-Cy5、PE-Cy7、APC、PerCP、PerCP-Cy5.5、Pacific Blue、Pacific Orange、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 700、Biotin等多达13种,满足客户各类实验需求。
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