超强应援：如何选择荧光素酶报告基因产品？

      一 、什么是荧光素酶报告基因？

     报告基因（Reporter Gene）：通常指可编码某种蛋白或酶，其表达产物容易被检测，并且能与内源性背景蛋白相区别的基因，通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。

     而理想的报告基因必须具备以下几个条件：

     1.编码的表达产物必须与细胞内源性的所有基因相区别，编码产物的活性不受宿主细胞的干预。

     2.有快速简便、经济、灵敏的检测方法，且重现性好、结果可靠，测量数据应该有较宽的线性范围。

     3.细胞内的其他基因产物不会干扰报告基因产物的检测，同时报告基因的表达也不改变宿主细胞的生理功能。

        常用的报告基因有：

     氯霉素乙酰转移酶 （CAT），氯霉素乙酰转移酶 （CAT），人生长激素（hGH），分泌型碱性磷酸酶（SEAP），荧光素酶（Luciferase），荧光蛋白。今天我们就来说说荧光素酶报告基因。

     荧光素酶（Luciferase）是自然界中能发出荧光的酶的统称。他们可以通过酶促反应催化底物产生自发荧光。荧光素酶因其便于检测和灵敏度高等特性常做为报告基因被广泛用于生化检测实验中。

     其中应用最广泛的是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase ）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase），两者可分别催化各自的底物发出不同颜色的荧光，且两种光吸收波长不同，检测互不干扰，因此可在同一个化学反应体系中同时使用，由此双荧光素酶报告基因系统受到广泛青睐。

     了解了什么是报告基因和荧光素酶后，我们来看看什么是荧光素酶报告基因。

     荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。这种报告系统，是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。分单荧光素酶报告基因和双荧光素酶报告基因。

     双荧光素酶报告基团主要应用方向有：

     1.验证microRNA同mRNA靶向互作；

     2.验证microRNA同lncRNA靶向互作；

     3.启动子结构分析

     4.启动子SNP分析

     5.验证特定转录因子同其调控序列的作用

     6.分析信号通路是否激活等。

        二 如何选择荧光素酶产品？

      我们知道有单荧光素酶报告基因和双荧光素酶报告基因，我们就需要根据自己的实验需要构建载体，首先我们需要了解自己到底要做什么？清楚的知道我们的实验设计方案和目的。一般来说，双荧光素酶体系应用于：

     （1）监测细胞数量（实验前&实验后，例如细胞毒性的影响）

     （2）评估转染效率，消除组间转染效率的影响

     （3）分析实验结果的特异性

     （4）稳定细胞系实验中需检测不同因子对稳定细胞系的影响，用对照（双荧光素酶体系）去检测可能的细胞毒性以及对特异性的影响

      单荧光素酶系统则适用于：

     （1）同一实验组进行多次检测分析（活细胞中监测时间曲线动态分析）

     （2）稳定细胞系，转染/转导效率在稳定细胞系中并不非常重要

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       1.我们有双荧光素酶报告载体产品

       2.还有分泌型碱性磷酸酶SEAP报告基因载体的产品

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     （1）双荧光素酶活性检测产品

     （2） 单荧光素酶检测

     （3）稳定型双荧光素酶活性检测产品，适用于高通量荧光素酶活性检测

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