Immunochemistry介导细胞焦亡的Caspase-1活性检测试剂盒

发布者：艾美捷科技发布时间：2022-12-15

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程序性细胞死亡 (Programmed cell death, PCD) 是多细胞生物中，由基因调控的细胞自杀过程，常见的PCD包括细胞焦亡(Pyroptosis)、凋亡(Apoptosis)和自噬(Autophagy)。

程序性细胞死亡

类型		细胞凋亡(Apoptosis)	细胞焦亡(Pyroptosis)	细胞自噬(Autophagy)
定义		为维持内环境稳态而发生的细胞主动死亡的过程，不产生炎症。	又称细胞炎性坏死，炎性小体引发的一种程序性细胞死亡方式。	细胞通过溶酶体(如动物)或液泡(如植物、酵母菌)降解自身组分的死亡过程。
细胞结构	细胞形态	缩小	细胞膨大，变形	产生空泡
	细胞膜	膜结构完整	细胞膜破裂	膜结构正常
	细胞器	完整	变形	被自噬体吞噬，最后被溶酶体消化
常见的检测方式		Caspase-2/3/6/7/8/9/10活性测定；PARP断裂分析；Annexin-V-FITC/PI法检测细胞膜变化；线粒体膜电位（JC-1、JC-10）；TUNEL法检测DNA片段化	caspase-1/4/5/11活性测定；Western Blot检测GSDMD的裂解；Western Blot、ELISA法检测IL-1β、IL-18炎症因子的切割成熟和释放水平	Western Blot、ELISA法检测自噬标志蛋白LC3的转换（LC3-I/LC3-II）；自噬体荧光单/双标法

今天我们就来聊一聊细胞焦亡(Pyroptosis)。当细胞发生焦亡时，由于细胞膜破裂导致内容物的释放，会激活强烈的炎症反应。细胞焦亡激活的通路包括依赖Caspase-1的经典途径和依赖Caspase-4、5、11的非经典途径。

依赖Caspase-1的细胞焦亡经典途径：

Caspase-1首先被激活，激活的Caspase-1切割Gasdermin D，生成含氮端活性域的肽段，该结构域结合膜脂并在细胞膜上打孔，导致细胞渗透压的变化，进而发生胀大直至细胞膜破裂。同时，活化的Caspase-1对IL-1β和IL-18的前体进行切割，形成有活性的IL-1β和IL-18，并释放到胞外，募集炎症细胞聚集，扩大炎症反应。

依赖Caspase-4、5、11的细胞焦亡非经典途径：

通常是细胞质脂多糖（lipopoly-saccharide，LPS）直接激活Caspase-4、Caspase-5和Caspase-11，活化的Caspase-4、5、11切割Gasdermin D产生与Caspase-1相同的裂解作用，从而导致细胞膜穿孔。

细胞质脂多糖

细胞焦亡与细胞凋亡相似，与细胞凋亡不同的是，细胞焦亡主要是由caspase-1激活的。因此检测caspase-1活性是细胞焦亡分析的关键。

美国ICT的用于细胞焦亡分析的Caspase-1检测试剂盒利用FLICA?技术检测Caspase-1活性。这些试剂盒包含caspase-1抑制剂，该抑制剂包含caspase-1的首选结合序列Tyr-Val-Ala-Asp (YVAD)。FLICA试剂FAM-YVAD-FMK（最佳激发波长为488-492 nm，最佳发射波长为515-535 nm），是无细胞毒性的，细胞膜渗透抑制剂。进入细胞，并不可逆地与活化的caspase-1结合。任何未结合的FAM-YVAD-FMK-FLICA试剂扩散出细胞并被冲走。因此留在细胞内的绿色荧光直接体现了活性caspase-1酶活性的。荧光结果可通过荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪进行分析。

货号	名称	规格	组分
97	FAM-FLICA Caspase-1 Assay	25Tests	1. FLICA Caspase-1 Reagent (FAM-YVAD-FMK) 2. 10X Apoptosis Wash Buffer 3. Fixative 4. Propidium Iodide 5. Hoechst 33342
98	FAM-FLICA Caspase-1 Assay	100Tests
9145	Pyroptosis/Caspase-1 Assay, Green	25-50Tests	1. FLICA Caspase-1 Inhibitor Reagent (FAM-YVAD-FMK) 2. 10X Cellular Wash Buffer 3. Fixative 4. Hoechst 33342 5. Nigericin
9146	Pyroptosis/Caspase-1 Assay, Green	100-200Tests
9158	Pyroptosis/Caspase-1 Assay,Far Red	25-50Tests	1. 660-YVAD-FMK caspase-1 inhibitor reagent 2. 10X Cellular Wash Buffer 3. Fixative 4. Hoechst 33342 5. Nigericin
9122	FLICA 660 Caspase-1 Assay	25-50Tests	1. FLICA Caspase-1 Reagent (660-YVAD-FMK) 2. 10X Cellular Wash Buffer 3. Fixative
6698	Nigericin（尼日尔霉素）	0.5?moles

* 仅供科研使用，不得用于医疗.

用阴性对照(非诱导的，A)或5 ng/mL的佛波酯PMA诱导处理的THP-1细胞

用阴性对照(非诱导的，A)或5 ng/mL的佛波酯PMA诱导处理的THP-1细胞，使其成为巨噬细胞样细胞(诱导的，B)。48小时后，从诱导种群中去除PMA，用含有10 ng/mL LPS的新鲜培养基替代，诱导caspase-1激活。2小时后，细胞被FAM-YVAD-FMK染色1小时，清洗，并在显微镜下观察。在诱导的样品中，许多细胞呈现亮绿色，表明caspase-1活性水平增加(B，诱导，右)。在非诱导的样品中，很少可见绿色细胞，表明caspase-1活性水平较低(a，非诱导，左)。

美国ICT除了可提供全面的细胞活性检测相关试剂，包括凋亡、 caspase、自噬、细胞毒性、坏死等相关检测，还可以同时提供高质量高灵敏度的 ELISA以及相关试剂，包括包被液、封闭液、冲洗液、底物、终止液、板子等等。 ——————————————————————————————————————————

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