荧光信号放大：TSA优秀替代品—PSA技术

      Power Styramide™信号放大（PSA™）是一种新颖的酶检测信号放大方法，用于检测细胞和组织中的低丰度靶标。通过将iFluor™染料的卓越亮度和光稳定性与多HRP介导的PSA™成像相结合，可产生明亮的荧光信号，其准确性和灵敏度明显高于传统的免疫组织化学，免疫细胞化学和原位杂交技术。

       Power Styramide™信号放大（PSA）

       与酪酰胺信号放大（TSA）相似，PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。 PSA自由基具有比酪胺自由基高得多的反应性，使得PSA系统比传统的TSA试剂更快，更稳健和灵敏。与酪胺试剂相比，Styramide 缀合物具有以更高效率标记靶标的能力，因此产生显着更高的荧光信号。PSA™成像技术可以轻松应用于任何检测过程中需要加入HRP的应用中，例如IHC，ICC，IF，  原位杂交和ELISA。

      图1.PSA™检测方法检测原理示意图。使用常规的检测方法，用未标记的一抗和HRP-二抗缀和物检测细胞或组织样品。HRP催化标记的Styramide™转化为高活性的Styramide™自由基，这些自由基与酶位点上或附近的酪氨酸残基共价结合。

       PSA™成像系统的优势：

      每个HRP标签的多个Styramide™底物的快速催化和共价沉积所产生的Power Styramide™信号放大转化成了许多实际优势，包括简单，灵敏度和特异性增强以及与其他技术的兼容性。Styramide™基团的较高反应活性，使其在HRP-靶标相互作用位点更牢固，更快速地标记，从而比TSA产生更强的信号和更好的空间分辨率。

        PSA™特点及优势：

       超灵敏的低丰度靶标检测，比IHC，ICC和IF方法高100倍

       高荧光强度，比酪酰胺（TSA）高10至50倍

       与其他荧光标记，染色技术和PSA™成像试剂盒兼容，可进行多重分析

       与放射线检测相比，PSA™自由基具有更高的反应活性，可提供更快的结果以及同等的灵敏度和分辨率

       保留珍贵的抗体，PSA™标记可减少一抗使用量，也能达到同等水平的灵敏度

       PSA™成像试剂盒易于使用，并提供足够的试剂用于100次测试

iFluor™594 Styramide™ （货号45035）	AlexaFluor®594 tyramide（货号11082）

       优越的检测灵敏度

      将PSA™成像应用于免疫染色实验中，可以增加一抗稀释度，而不会使测定灵敏度降低。此外，增加一抗稀释度会降低非特异性背景信号，并克服固定方法不当或目标表达水平低引起的免疫标记不足。

      图3. Power Styramide™信号放大（PSA™）套件的灵敏度。固定，渗透并用不同浓度的兔抗微管蛋白一抗标记HeLa细胞。厂商建议的稀释度为1：500或2ug / ml。然后，在我们的iFluor™488 PSA™成像试剂盒中用山羊抗兔IgG，AlexaFluor®488标记的酪酰胺或AlexaFluor®488标记的山羊抗兔IgG的试剂对细胞进行染色。在相同条件下（使用FITC滤光片组并在相同的曝光时间下进行分析）从每种处理中捕获细胞图像。测量了相对荧光信号强度，并比较了不同检测方法之间的荧光强度。

        多种PSA™多重染色

       PSA™系统经过设计，可与其他荧光发生器，细胞和组织染色技术以及其他PSA™成像套件兼容，从而可以同时可视化多个目标。与TSA和荧光二抗相比，PSA™的检测阈值较低，还可以检测在同一宿主物种中产生的，但信号之间无明显串扰的两个靶标。PSA™成像兼容：

       荧光标记和复染物（例如DAPI，Hoechsts）

       荧光蛋白（例如GFP，YFP，RFP）

       其他Styramide™试剂

       其他PSA™成像套件

       酪酰胺试剂和酪酰胺成像试剂盒

iFluor™488 PSA™试剂盒（货号：45205）

iFluor™555 PSA™试剂盒（货号45270）

DAPI （货号17507）

合并后

      图4.使用iFluor™PSA™成像试剂盒对甲醛固定，石蜡包埋的人肺腺癌依次进行免疫染色。用兔抗EpCam抗体和带有山羊抗兔IgG（目录号45205）的iFluor™488 PSA™成像试剂盒标记EpCam，然后洗涤。用小鼠抗Pan Keratin抗体标记Pan-Keratin，iFluor™555 PSA™成像试剂盒带有山羊抗小鼠IgG（目录号45270）标记。细胞核用DAPI（目录号17507）标记。在共聚焦显微镜上采集图像。

        灵活的工作流程：与IHC，ICC，ISH和流式细胞仪兼容：

       PSA™成像技术可适用于能在其检测方案中添加HRP的任何应用，并且与免疫学应用中常用的样品类型和荧光成像平台兼容。与传统的IHC，ICC，ISH和FC应用程序结合使用时，PSA™成像可显著提高检测灵敏度，而不会降低图像分辨率或增加背景信号。

       1. 免疫细胞化学（ICC）

      HL-60细胞的CD45表面受体染色。Hl-60细胞用4％甲醛固定，通透并用0.2 µg / mL抗CD45一抗标记。然后将细胞用iFluor™647 Styramide™染色，并使用Cy5滤光片拍摄的荧光图像。

        2. 原位杂交（ISH）

      使用生物素化的PNA探针通过原位杂交对着丝粒进行染色。使用标准方案将Jurkat细胞固定并透化，用链霉亲和素HRP缀合物检测每个染色体的着丝粒，并用iFluor 488苯乙烯酰胺试剂可视化，用DAPI染色细胞核。

      3. 流式细胞仪

     使用iF488标记的山羊抗兔IgG方法，酪酰胺方法或苯乙烯酰胺方法对Jurkat细胞中的pAKT进行流式细胞分析。苯乙烯酰胺扩增方法的信号强度比山羊抗兔IgG-iFluor™488直接染色高10倍，比Alexa Fluor 488酪酰胺染料染色高5倍。

        PSA™成像工作流程：

       PSA™成像利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性在原位生成目标蛋白或核酸序列的高密度标记。与IHC，ICC和ISH程序的常规工作流程相似，PSA™成像易于执行，包括几个简单的过程。在此工作流程中，将荧光二抗替换为多HRP标记二抗，唯一的附加步骤是与标记的Styramide™一起孵育。

      1.固定，透化和封闭细胞或组织样品。用未标记的一抗，生物素化一抗或生物素化核酸探针孵育样品。

      2.加入HRP标记二抗或HRP-链霉亲和素偶联物。

      3.添加iFluor™染料Styramide™工作溶液，进行HRP催化的Styramide™沉积。

      4.装入样品并检测信号。

      图5. Power Styramide™信号放大（PSA™）的工作流程。通过类似于常规ICC和IHC方法的工作流程，PSA™试剂盒和Styramide™试剂可以通过几个简单的步骤就可以对所需目标物进行灵敏检测。

        Power Styramide™信号放大相关产品信息汇总：

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