多聚HRP，低丰度蛋白信号放大器

曾经有小伙伴反应，我的目的蛋白做WB没有条带或者条带特别淡，做IHC也没有阳性结果，尝试了不同稀释比的抗原，一抗，二抗，更换了不同厂家生产的抗体，结果还是不好，内参和其他蛋白都有正常的结果，到底是什么原因了？最后我们提醒客户，是不是目的蛋白本身的表达量就非常低，增加抗体浓度的作用也是非常有限的，最后客户又看到相关文献，报道该目的蛋白在正常样本种表达量确实特别低，都到皮克级别了，难怪常规的WB和IHC检测结果不好，于是我们给客户推荐了多聚HRP标记的二抗，成功检测到了阳性结果。

Poly HRP是一种增强信号的酶标记物，由共价辣根过氧化物酶（HRP）聚合物组成。目的蛋白的信号通过抗体传递给Poly HRP上携带的大量HRP分子，然后HRP分子作用于底物释放信号，使得目的蛋白检测信号得到放大，这些信号放大程度与HRP聚合范围成正比，从而可以利用多聚HRP在免疫分析中检测到低丰度蛋白（pg级别范围）。

HRP聚合体以及SA－PolyHRP40示意图

注：

灰色的是SA（链霉亲和素）

褐色的是HRP

链霉亲和素-poly HRP缀合物（SA－PolyHRP）由五个相同的HRP同聚物组成，同时与多个链霉亲和素分子共价偶联。目前生产过程中使用了三种不同的同聚物，它们分别是PolyHRP20、PolyHRP40和PolyHRP80。链霉亲和素-PolyHRP80比链霉亲和素-PolyHRP40灵敏度更高，链霉亲和素-PolyHRP40比链霉亲和素-PolyHRP20灵敏度更高。

不同尺寸HRP多聚体示意图

用链霉亲和素-PolyHRP技术检测技术标记非常简单，可以将它们结合到现有的测定系统中，现有的步骤，孵育间隔等几乎不需要改变。所需试剂基本上与使用标准链霉亲和素-HRP进行的常规ELISA相同。类似地，PolyHRP几乎可用于任何以HRP底物开发的检测系统（比色法、荧光法、包括化学发光），这也意味着与现有的ELISA和IHC仪器完全兼容。PolyHRP检测可能有利的其他分析方法包括高灵敏度DNA/RNA杂交分析和配体受体分析。

PolyHRP的优势：

灵敏度高：polyHRP可以检测极低的目标(皮克-飞克范围)，信噪比高；

灵活：兼容的显色，荧光和化学发光底物

高效：试剂纯度高，不含未结合的分子，具有高比活度和低背景

稳定：即用型液体试剂可保存在4℃，

性价比高：每次测定所需的偶联物远远少于常规测定

用途多样：兼容ELISA, Western blotting，免疫组化等

易于使用：可直接替代免疫分析和其他检测方法

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