磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC),EC=4.1.1.31,属于一个羧酸裂解酶家族,它催化将二氧化碳添加到磷酸烯醇式乙酸盐(PEP)中形成草酰乙酸盐。备选名称:PEPCase 1、PEPCase 3、PEPC 1、PEPC 3。
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磷酸烯醇丙酮酸羧化酶 | AS09-458 | 查看 |
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基本参数:
免疫原:KLH缀合的合成肽高度保守的PEPC1和来自不同植物物种的序列,包括拟南芥Q9MAH0、At1g53310(PEPC1)、Q84VW9、At3g14940(PEPC3)。被选择来引发该抗体的肽在该酶的细菌类型NP_177043.2(PEPC4)中也是完全保守的。对于玉米来说,肽以PEP1和PEP4异构体的形式存在。
宿主:兔子
克隆性:多克隆
纯度:在pH 7.4的PBS中的免疫原亲和纯化血清。
格式化:冻干
数量:50?g
重组:为重组添加50?l无菌水
储存:在-20°C条件下冷冻干燥/复原储存;一旦复原,就制作等分试样,以避免重复的冻融循环。请记得在打开管子之前先短暂旋转管子,以避免材料粘附在管子的盖子或侧面可能造成的任何损失。请不要重复使用此初级抗体溶液。在蓝细菌样本的情况下,第二次孵育时将没有信号。
测试应用:免疫定位(IL)、蛋白质印迹(WB)
推荐稀释度:1:500(IL),1/1000-:10000(WB)
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶应用示例:
在4-12%NuPage(Invitrogen)LDS-PAGE上分离来自(1)用蛋白质提取缓冲液提取的拟南芥叶、PEB(AS08 300)、(2)用PEB提取的菠菜总细胞、(3)用PEB提取的大麦总细胞和(4)用PE布提取的玉米总细胞的5?g总蛋白,并用PVDF印迹1h。在室温下,在搅拌下,在20mM Tris、137mM氯化钠(pH 7.6)和0.1%(v/v)Tween-20(TBS-T)中转移2%封闭试剂(GE Healthcare)1小时后,立即封闭印迹。将印迹在1∶10000稀释的一级抗体中在室温下搅拌孵育1h。倾析抗体溶液,并短暂漂洗印迹两次,然后在室温下搅拌下在TBS-T中洗涤一次15分钟和3次5分钟。在室温下,将印迹在2%封闭溶液中稀释至1:50000的第二抗体(抗兔IgG马萝卜过氧化物酶缀合物)中搅拌孵育1h。如上所述洗涤印迹,并根据制造商说明用化学发光检测试剂显影5分钟。使用CCD成像器(FluorSMax,Bio-Rad)和Quantity One软件(Bio-Rad)获得印迹的图像。
部分引用文献:
Durall et al. (2021). Production of succinate by engineered strains of Synechocystis PCC 6803 overexpressing phosphoenolpyruvate carboxylase and a glyoxylate shunt. Microb Cell Fact. 2021 Feb 8;20(1):39. doi: 10.1186/s12934-021-01529-y. PMID: 33557832; PMCID: PMC7871529.
Wang et al. (2021). Brassinosteroids inhibit miRNA-mediated translational repression by decreasing AGO1 on the endoplasmic reticulum. J Integr Plant Biol. 2021 May 21. doi: 10.1111/jipb.13139. Epub ahead of print. PMID: 34020507.
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