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m6A RNA甲基化定量试剂盒(P-9005)中文说明书及常见问题解答

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-08-05     
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在之前的文章中,我们复盘了m6A甲基化疑难杂症&治疗方法

 

N6-甲基腺嘌呤(m6A)是真核生物最常见和最丰富的RNA分子修饰,占所有 RNA 甲基化的 80% 以上。随着RNA甲基化研究越来越热,科学研究界刮起了一阵m6A RNA甲基化研究的飓风。站在风口的研究学者们,都选择了Epigentek品牌的P-9005产品EpiQuik M6A RNA Methylation Quantification Kit(M6A RNA甲基化定量检测试剂盒)

EpigentekM6A RNA甲基化定量检测试剂盒.jpg

 

试剂盒原理

P-9005使用独家配方试剂使RNA被高效的结合吸附在微孔板上。使用特异性捕获 N6-甲基腺苷抗体和检测抗体检测 N6-甲基腺苷 (m6A)。检测到的信号得到增强,然后通过读取微孔板分光光度计中 450 nm 波长的吸光度进行比色定量。m6A 的量与测得的 OD 强度成正比。

 

P-9005-中文说明书链接

 

常见问题解答

 

在使用P-9005试剂盒的过程中,客户往往会提出各种问题,小艾这里整理了一下常见的四大类FAQ。

 

一、实验样品类


1.试剂盒样品有没有种属限制?

解答:P-9005试剂盒没有种属限制,但是需要是提取好的RNA样品。

 

2.RNA样品纯度要求和输入量?

解答:RNA纯度要求:A260/280>1.9;A260/230>1.7。无DNA污染;另外RNA序列长度大于80nts,以便RNA可以较好的结合在板上。

RNA输入量:对于每次实验RNA的输入量是100-300ng。最为理想的RNA的输入量应该是200ng,正如我们所知m6A通常不到总RNA的0.1%。

 

二、试剂盒类


1.有效期是多久?

解答:客户收到货后,有效期6个月。

 

2.P-9005试剂盒里的组分是否可以单独购买吗?

解答:可以单独购买,但是建议客户购买完整试剂盒。

 

3.在Date Sheet中,它没有告诉我们应该使用什么样的材料来避免RNase,RNase是否会影响这个试剂盒的结果?

解答:实验中涉及到的试剂都是不含RNase的,而且当RNA结合在板上后,RNase将不会再影响实验结果。

 

4.客户的缓冲液是50mM的PH8的tris-盐酸缓冲液,可以用这个缓冲液分装吗?

解答:尽量推荐使用与厂家相同配方的溶液进行分装。其他溶度的缓冲液是否可用,需要客户自行尝试。

 

三、产品说明书类

 

1.试剂盒孔板数指的是可以检测的样品数量吗?

解答:48/96孔试剂盒只能做48/96个test,而不是48/96个样品。相应的试剂会比48孔稍微多一点,因为要考虑到加样损耗的因素。

 

2.加样时RNA样品体积多少合适?

解答:在与RNA的结合过程中,建议的200ngRNA的样本量体积在1-8uL,这样才能保证最佳的结合效率。

 

3.抗体稀释比例是多少?

解答:CA和DA的原始浓度都是1000X,但是稀释倍数不同,CA按照1:1000稀释,DA按照1:2000稀释,加大DA的稀释比例降低背景信号。

 

4.P-9005做m6A甲基化的话,为什么要用带滤芯的枪头?还有在第4步,m6A RNA捕获时,洗涤的操作溶液是直接用枪头吸掉呢,还是可以直接倒掉?

解答:这里使用带滤芯枪头,目的是最大限度避免移液器带来的交叉污染。如果客户操作无误,用普通枪头也是可以的;使用手动移液器代替典型的板轻拂/倾倒方法,以确保完全去除缓冲液并最大程度减少孔间污染。注意,将移液枪沿孔的一侧慢慢向底部引导,避免刮擦到孔底表面。

 

5.加入80ul的结合液后,再加入RNA,孵育90min后,将BS移除,这时候RNA在哪?

解答:RNA被高效RNA结合液结合在孔板底表面。八联管孔底表面有预涂处理,带正电,RNA的磷酸骨架带负电,在BS结合液(Binding Solution)的作用下,带负电的RNA可以稳定的结合在板上。

 

艾美捷科技(AmyJet Scientific)作为一家具有高端的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Biosensis、Biovision、BioVendor、Caisson Labs、Cell Biolabs、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、ImmunoStep、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Lumiprobe、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、US Biological、TRC等,可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。

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