全套线粒体研究工具，帮你“一网打尽”！

       线粒体是存在于所有真核细胞中的独特的膜结合细胞器，作为ATP生产和细胞能量供应的主要场所，线粒体的独特方面（包括称为mDNA的单独遗传物质，其自身的蛋白质合成机制以及严格调节的膜电位梯度）使其成为重要的研究课题，另外，随着衰老过程和更多其他人类疾病方面的研究发现，线粒体的作用比以往更加值得我们研究。

       这期主要给大家带来线粒体荧光探针（活细胞和固定细胞），线粒体膜电位探针，ATP检测，线粒体自噬检测，线粒体通透性转换孔（MPTP）检测相关工具。

       一．细胞线粒体染料

       1. 用于标记活细胞线粒体的可用MitoLite™染料

       2. CytoFix™红色固定线粒体染色

      CytoFix™Red线粒体染色剂增强的细胞维持能力可使线粒体局部荧光得到保持，即使固定过程中线粒体膜电位丧失后也可以保留。该染料产生的荧光信号在溶酶体中得到很好的保留，使其便于长期跟踪线粒体。CytoFix™红色线粒体染色剂可与GFP表达的细胞，其他荧光偶联物和其他细胞器染色剂一起使用，进行多色分析。它既可用于悬浮细胞，也可用于贴壁细胞，并易于适应各种荧光平台。

       CytoFix™红色线粒体染色的特征：

      线粒体染色效率高

      固定后可长期保留

      操作时间短，标记步骤简便

      图2.在96孔黑边框透明底板上用CytoFix™MitoRed染色的HeLa细胞的荧光图像。

       CytoFix™Red—适用于固定细胞线粒体染色

       二．线粒体膜电位：

      电子传输链产生的线粒体膜电位（ΔΨm）是健康的线粒体功能所必需的关键参数。与质子梯度一起，它产生了线粒体ATP合成背后的驱动力。它通过选择性消除功能异常的线粒体在线粒体稳态中发挥关键作用，并且是线粒体钙稳态的重要组成部分。

      凋亡早期的显着特征是正常线粒体功能的破坏， 线粒体膜的破坏和氧化还原电位可能会引起细胞活力的不必要损失，并成为导致各种疾病的原因。我们提供各种各样的荧光探针，用于分析活细胞中正常线粒体活性的各个方面，包括活性氧（ROS）产生，线粒体膜电位和钙通量。

        1. JC-10™双发射膜电位（ΔΨm)探针

       JC-10™是JC-1的衍生物，是电位依赖性探针，用于通过流式细胞仪，荧光显微镜和基于微孔板的荧光测定法确定ΔΨm。在健康细胞中，JC-10™选择性地聚集在线粒体中，生成橙色的JC聚集体，该聚集体在590 nm处显示出较宽的激发光谱和最大发射。然而，在具有低ΔΨm的凋亡和坏死细胞中，JC-10™从线粒体中扩散出来，并生成JC-10™单体，导致向绿色发射（525 nm）处转移。JC-10™允许以定性和定量方式来可视化ΔΨm的变化，分别考虑从橙色到绿色的荧光发射和荧光强度比的变化。它已成功用作多种样本类型的ΔΨm指示剂，包括肌细胞，神经元等。

       JC-10™的特点：

      易于使用：稀释到水性缓冲液中时，JC-10™不会沉淀，从而消除了伪影。

      坚固：JC-10™由于在水性介质中的溶解度提高和灵敏度更高，因此测定偏差较小。

      增强的信号：JC-10™具有比JC-1高的信噪比。

      增强的灵敏度：在所有测试的细胞系中，JC-10™能够比JC-1更好地检测到ΔΨm损失的细微变化。

      广泛的应用：JC-10™可用于原代大鼠肝细胞检测

      方便：JC-10™与荧光酶标仪，细胞成像仪和流式细胞仪兼容。

      图3.用JC-10™（货号22204）和JC-1（货号22200）在Jurkat细胞中测定了喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。将Jurkat细胞用喜树碱（10 µM）处理4小时后，将JC-1和JC-10™染料加载溶液添加到孔中，并孵育30分钟。使用NOVOstar酶标仪（BMG Labtech）在Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm下测量了JC-1和JC-10™的J聚集体和单体形式的荧光强度。

       JC-10™和JC-1双发射线粒体膜电位探针

        2. 线粒体选择性罗丹明酯

      细胞渗透性阳离子罗丹明，例如TMRE和TMRM，很容易被活性线粒体隔离，通常用于标记活细胞中的线粒体。像JC-10™一样，线粒体中TMRE和TMRM的吸收是由线粒体膜电位驱动的。两种染料都已成功用于动态和原位定量检测，用于筛选线粒体通透性转换孔的抑制剂，评估活细胞中线粒体的功能，并可用于区分活的和死的细胞群，这些电位染料表现出最小的自发淬灭性，低细胞毒性和合理的光稳定性，它们的荧光强度可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行测量。与TMRM相比，TMRE的疏水性略强。

       用于测量线粒体膜电位的电位染料

       三．ATP测定：

      三磷酸腺苷（ATP）是一种复杂的有机分子，参与细胞的能量生成，代谢调节和细胞信号传导。它作为主要能源存在于所有活生物体中，并在没有活生物体的情况下迅速降解。因此，ATP测定是一种有用的工具，可用于各种研究应用程序中，以鉴定活生物体的存在。常见的应用包括细胞活力和细胞毒性，表面细菌的检测，水中细菌的定量，培养中的体细胞以及食品质量和污染测试。

       我们的PhosphoWorks™发光ATP分析提供了一种快速，简单且均一的生物发光方法，可用于通过ATP检测确定哺乳动物细胞的细胞活力，细胞毒性和增殖。

       用于测量ATP活性，以及生成或消耗：

        四．线粒体自噬：

      线粒体自噬主要是由去极化线粒体的积累引起的。线粒体作为消除系统，消除了由氧化应激和DNA损伤引起的功能异常的线粒体，导致螯合成自噬体，然后与溶酶体融合并发生降解。

       五．线粒体通透性转换孔（MPTP）：

      线粒体通透性转换孔（MPT孔或MPTP）是由线粒体内膜和内层膜的组分形成的非特异性通道，可能参与细胞凋亡过程中线粒体组分的释放。在健康细胞中，MPTP在打开和关闭状态之间转换，但在细胞死亡期间，MPTP会极大地改变线粒体的通透性。细胞色素c的释放和线粒体膜电位的丢失发生在连续的孔活化之后。

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