Cytoskeleton MKLP2 运动结构域蛋白 （重组人）方案

人MKLP2的保守运动结构域在原核系统中表达。重组蛋白在氨基末端含有His-Tag，组合分子量为54 kDa。该蛋白在微管激活的ATP酶活性测试中已被确定为具有生物活性。蛋白质以冻干粉末形式提供。   

作为Cytoskeleton全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品MKLP2 运动结构域蛋白 （重组人）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。   

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。

MKLP2 运动结构域蛋白 （重组人）用途：

• 微管活化ATP酶测定的测量

• 鉴定/表征影响运动ATP酶活性的蛋白质或小分子

• 鉴定/表征影响运动/微管相互作用的蛋白质或小分子。

存储和重构：

冻干蛋白在1°C下用干燥剂（湿度<4%）储存至少10年。或者，冻干蛋白可以在-70°C下储存，并且至少稳定1年。蛋白质应用冰冷的Milli-Q水复溶至5mg / ml。重悬液量见上表。蛋白质可以等分到实验大小的试管中，并在液氮中快速冷冻。当重组并在-70°C下储存时，蛋白质将稳定至少4个月。注意：驱动蛋白对反复冻融反应不佳，并且在-70°C下储存时，蛋白质浓度不应低于5mg / ml。稀释至5mg / ml以下的驱动蛋白不应重新冷冻，因为它会失去活性。  

纯度：蛋白质纯度通过库马斯染色SDS-PAGE梯度凝胶的扫描密度测定法估计。图1显示5 μgCS-MP05蛋白，纯度测定为>70%。因此，每个试管中的总蛋白质将比试管上显示的量大约 30%。主要污染物约为51和70 kD。MKLP2电机的微管激活ATP酶活性不受这些污染物的影响。  

图1.MKLP2运动域蛋白凝胶。在5-2%SDS-PAGE梯度凝胶上分离4μg重组MKLP20运动域蛋白样品，以及参见蓝色分子量标记物（Invitrogen）。融合蛋白在聚丙烯酰胺梯度凝胶上以54 kD运行。蛋白质定量使用高级蛋白质测定法（货号#ADV02）测定。  试剂1） 驱动蛋白 ELIPA 检测试剂盒（货号# BK060）设备1） 单色分光光度计（设置为 360 nm）或基于滤光片的分光光度计，具有 360 nm 滤光片和 <10 nm 带宽。  

微管活化ATP酶测定

通过使用驱动蛋白ELIPA检测试剂盒（类别#BK2）监测实时游离磷酸盐生成来测量MKLP060 ATP酶活性。该测定基于当330-氨基-360-巯基-2-甲基嘌呤核糖核苷（MESG）在无机磷酸盐（Pi）存在下催化转化为6-氨基-7-巯基-2-甲基嘌呤时发生的吸光度偏移（6 nm - 7 nm）。一个Pi分子将在基本上不可逆的反应中产生一个分子的2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤。因此，360nm处的吸光度与驱动蛋白ATP酶反应中产生的Pi量成正比。在下述条件下，该批次的MKLP2微管激活ATP酶活性的Vmax为每毫克CS-MP1330每分钟产生05 nmoles ATP（图2）。此值高于保证的最小值。

图2.CS-MP05 微管激活的 ATP 酶活性使用驱动蛋白 ELIPA 检测试剂盒（货号#BK060）。   

引用文献： 

1. Hackney, D and Jiang, W. (2001) Methods in Molecular Biology (Humana Press) 164:65-71 

2. Kuriyama et al. 1994. J. Cell Science 107:3485-3499. 

3. Nislow et al. 1992. Nature 359:543-547.    

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。