超全超实用的荧光素酶报告基因检测工具

       荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称，其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Fire?y)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase，同时近年来研究得较多的来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（Gauss luciferase）。

      荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。

       萤火虫萤光素酶

      最通用和最常见的报告基因是北美萤火虫photinus pyralis的荧光素酶，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性。高浓度（体内）甚至没有毒性，可用于原核和真核细胞。

       Amplite™萤光素酶报告基因检测试剂盒

      图1.在带有NOVOstar读板器（BMG Labtech）的白色96孔板中，使用Amplite™萤光素酶报告基因基因检测试剂盒（12518）检测萤光素酶剂量反应。该试剂盒可在20min-5h的孵育时间内检测到低至0.1pg /孔的萤光素酶，而不会丢失信号强度。半衰期超过4小时。

      Amplite™萤光素酶报告基因检测试剂盒（12518）使用无DTT专利配方来定量活细胞和细胞提取物中的萤光素酶活性。该测定基于萤火虫荧光素酶，萤火虫荧光素酶是一种单体的61 kD酶，可催化荧光素的两步氧化，在560 nm处产生光。

       Amplite™萤光素酶报告基因检测试剂盒特点：

      具有优化的“混合读取”测定规程，可与HTS液体处理仪器兼容

      具有高灵敏度，可用于需要低检测限的测定

      具有用于研究基因调控和功能的快速，简单且均一的生物发光测定法

      与标准细胞生长培养基的使用兼容

       高斯荧光素酶

      近年来，其他荧光素酶（例如高斯荧光素酶）的使用有所增加，因为这些报告基因较小，并且不需要ATP的存在。高斯荧光素酶是一种20 kD的蛋白质，可通过氧气催化腔肠素氧化，产生光。来自于海洋足类高斯氏菌的生物发光酶在表达后可有效地从哺乳动物细胞中分泌出来。

      Amplite™高斯荧光素酶报告基因测定

      图2.用Amplite高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒（蓝线，Cat＃12530）和其他某品牌高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒（红线）在96孔白板中使用NOVOstar读板仪测量分泌的高斯荧光素酶培养基对比图。

      Amplite™高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒使用专有的发光配方来定量细胞培养基中的荧光素酶活性。当该试剂与高斯荧光素酶相互作用时，产生发光产物，该发光产物提供强发光。

      Amplite高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒特点：

      提供了与HTS液体处理仪器兼容的所有基本组件

      它们具有高灵敏度，可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行

      半衰期为一小时的“辉光型”信号在大量检测板之间提供一致的信号

      与标准细胞生长培养基兼容

      海肾荧光素酶

      海肾萤光素酶是一种从海桑（Renilla reniformis）分离的36 kDa蛋白。与萤火虫荧光素酶相比，海肾荧光素酶的底物和辅因子要求不同。海肾荧光素酶在氧气存在下使用腔肠素，产生480 nm的蓝光。与萤火虫萤光素酶类似，海肾萤光素酶因其底物要求和光输出方面的差异而可用于双重报告检测。

       Amplite™海肾荧光素酶报告基因测定

      Amplite™Renilla萤光素酶报告基因检测试剂盒提供了一种快速，灵敏的方法，可以使用专有的发光配方在基于细胞的检测中检海肾萤光素酶的活性，与海肾萤光素酶相互作用后，该试剂产生具有强光的产物。

       Amplite™海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒特点：

      该测定法与标准细胞生长培养基兼容

      该试剂盒可以测量野生型和合成hRluc基因的原始表达或基因表达

      每个试剂盒均包含可以方便96孔和384孔板检测所必不可少的组分

      图3.用Amplite™Renilla荧光素酶报告基因检测试剂盒（12535）在白色的96孔板中用NOVOstar酶标仪（BMG Labtech）测量了Renilla荧光素酶。

      各类萤光素酶底物，辅因子和物理特性：

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