Cytoskeleton热销：KIF7 运动结构域蛋白 （重组人）

人驱动蛋白KIF7的保守运动结构域在大肠杆菌中表达。重组蛋白在氨基末端含有6组氨酸标签，组合分子量为44kDa。该蛋白已在微管激活的ATPase / GTPase活性测试中被确定为具有生物活性（见下文）。蛋白质以冻干粉末形式提供。   作为Cytoskeleton全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品KIF7 运动结构域蛋白 （重组人）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。   

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。

KIF7 运动结构域蛋白 （重组人）用途包括：

• 微管活化ATP酶/GTP酶测定的测量

• 鉴定/表征影响运动ATP酶/GTP酶活性的蛋白质或小分子

• 鉴定/表征影响运动/微管相互作用的蛋白质或小分子。

存储和重构

冻干蛋白在1°C下用干燥剂（湿度<4%）储存时可稳定保存10年。或者，冻干蛋白可以在-70°C下储存，并稳定保存1年。蛋白质应用蒸馏水或CMW缓冲液5（1 mM PIPES pH 100.7，0 mM KCl，200 mM MgCl 2，2 mM DTT，1μM ATP）复溶至20mg / ml。有关重悬液量，请参阅上表。蛋白质可以等分成实验大小的等分试样，在液氮中快速冷冻并储存在-70°C。 在这些条件下，蛋白质可稳定保存4个月。对于工作浓度，Kif7蛋白应在CMW缓冲液1中稀释。注意：驱动蛋白对反复冻融反应不佳，在-70°C下储存时，蛋白质浓度不应低于5mg / ml。稀释至5mg / ml以下的驱动蛋白不应重新冷冻，因为它会失去其生物活性。  

纯度

蛋白质纯度通过库马斯染色SDS-PAGE梯度凝胶的扫描密度测定法测定。图1显示了20 ug的KF51蛋白，测定纯度为>80%。因此，每个试管中的总蛋白质将比试管上显示的量大约20%。

图1.Kif7 电机域纯度凝胶。

在20-7%SDS-PAGE梯度凝胶上分离重组Kif6运动结构域蛋白（His4标记）的20ug样品以及Mark12分子量标记物（LifeTech）。重组Kif7蛋白的表观分子量为44kDa。蛋白质定量使用高级蛋白质测定法（货号#ADV02）测定。  

微管活化的ATP酶测定

通过使用驱动蛋白ELIPA检测试剂盒（货号#BK7）监测实时游离磷酸盐生成来测量KIF060 ATP酶和GTP酶活性。该测定基于330-氨基-360-巯基-2-甲基嘌呤核糖核苷（MESG）在无机磷酸盐（Pi）存在下催化转化为6-氨基-7-巯基-2-甲基嘌呤时发生的吸光度偏移（6 nm至7 nm）。一个Pi分子将在基本上不可逆的反应中产生一个分子的2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤。因此，360nm处的吸光度与驱动蛋白ATPase / GTP酶反应中产生的Pi量成正比。在下面概述的条件下，Kif7微管激活的ATP酶活性的Vmax为每mg Kif40每分钟产生的7nmoles Pi，对于GTP酶活性，为每mg每分钟产生的230nmoles Pi（图2）。  

试剂 

驱动蛋白 ELIPA 检测试剂盒（货号 # BK060）   

设备

单色分光光度计（设置为 360 nm）或基于滤光片的分光光度计，具有 360 nm 滤光片和 <10 nm 带宽。  

方法（ELIPA ATP酶测定）

反应在96孔板（300 ul反应体积）中进行。每个反应含有 5 ug Kif7 蛋白 （EG01）、0.7μM 紫杉醇稳定微管 （货号 # MT001）、0.2 mM MESG、0.3U PNP（嘌呤核苷酸磷酸化酶）、15 μM 紫杉醇、15 mM 管道 pH 7.0、5 mM MgCl 2、0.6 mM ATP。对照反应在没有KF51的情况下进行。这些反应在0分钟内给出<1.20 OD的读数。在以动力学模式和250nm吸光度波长设置的SpectraMax 360（分子器件）中测量反应。在室温下每30秒读取一次读数，总反应时间为20分钟。典型检测结果如图2所示。在给定时间内产生的Pi的nmoles通过使用磷酸盐标准曲线（未显示）来确定。

图2.KF51微管激活的ATP酶/ GTP酶活性使用驱动蛋白ELIPA检测试剂盒（货号#BK060）。

根据所述方法一式两份测定Kif7 ATPor GTP酶活性。将没有微管（开放符号）的对照反应与具有微管（闭合符号）的对照反应进行比较。  

KIF7 运动结构域蛋白 （重组人）文献引用： 

. Funk, CJ. et al., 2004. Anal Biochem. 329:68-76. 

. Hackney, D and Jiang, W. 2001. Methods in MolecularBiology (Humana Press). 164:65-71 

. Lockhart, A and Cross, RA. 1996. Biochemistry. 35:2365-2373 4. Sawin, KE. et al. 1992. Nature. 359:540-543.   

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。