细菌被广泛用于表达不同的蛋白质。然而,通过重组技术在细菌中表达的70-80%的蛋白通常包含在不溶性包涵体中(即蛋白质聚集体)中。由于折叠错误,在这些亚细胞结构中发现的蛋白质通常是无活性的。包涵体中重组蛋白的产率始终高于可溶性蛋白。这背后的原因被认为是不溶性蛋白质对细胞酶的蛋白水解的抗性。此外,不溶性重组蛋白在包涵体中的分离要比可溶性蛋白容易得多。这些因素有利于使用细菌发酵来扩大高价值蛋白质的获取。
什么是包涵体?
重组蛋白在宿主系统中高水平表达时,很容易形成不可溶、无生物活性的蛋白聚集体--包涵体。包涵体须经过变性溶解后,在适当条件下复性形成天然的构象,才能得到有生物活性蛋白。目前,大肠杆菌表达系统是生产重组蛋白最常用的表达体系,其重组蛋白的表达量可达细胞蛋白的50%,其他成分主要有一些杂蛋白(如 RNA聚合酶、核糖体组分、外膜蛋白等)、质粒 DNA、RNA 片断和脂质、肽聚糖、脂多糖等成分。
如何从诱导的细菌培养物中分离和纯化包涵体蛋白?艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商,为您推荐Norgen Biotek品牌的包涵体蛋白纯化试剂盒。
产品名称及描述 | 货号 | 规格 | 产品展示 |
ProteoSpin™ Inclusion Body Isolation Micro Kit | 10300 | 20次分析 | |
ProteoSpin™ Inclusion Body Isolation Maxi Kit | 17700 | 4次分析 |
ProteoSpin™包涵体分离纯化试剂盒有助于筛选表达在大肠杆菌克隆的包涵体中的重组蛋白。该试剂盒包含特殊配方的试剂,可使用以下三个过程实现包涵体蛋白的快速和高质量纯化:
1、裂解细菌细胞以释放固体形式的包涵体;
2、纯化的包涵体的溶解;
3、使用旋转柱色谱法纯化重组蛋白。
包涵体蛋白纯化试剂盒特色与优势:
1、操作快速简便。
2、包涵体蛋白分离和纯化的一体化解决方案。
3、完整的试剂盒包含细胞裂解液,包涵体溶解试剂,缓冲液和旋转柱用以纯化蛋白质。
4、纯化的重组蛋白质可用于SDS-PAGE ,2D凝胶,Western blots,质谱分析和其他应用。
包涵体蛋白纯化试剂盒,厂家测试:
货号:10300 | 酸性蛋白分离:分离重组50kDa嵌合蛋白。 |
货号:10300 | 碱性蛋白分离:分离重组RNaseA。 |
货号:17700 | 分离碱性蛋白质时蛋白质没有损失: 分离重组30kDa碱性蛋白质。1)是上样,第2道是上样后的流通道,3)是洗涤,4)是第一次洗脱,5)是第二次洗脱。 |
货号:17700
| 分离酸性蛋白质时没有蛋白质损失: 分离重组70kDa酸性蛋白质。 1)是上样,第2道是上样后的流通道,3)是洗涤,4)是第一次洗脱,5)是第二次洗脱。
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样品使用量与产出数据参考:
试剂盒参数比较 | 货号10300 | 货号17700 |
培养物最大体积 | 1.5 mL | 100 mL |
最小洗脱体积 | 30 µL | 4 mL |
产量 | 1.5 mL培养物产量2 - 50 µg | 100 mL培养物产量高达12 mg |
纯化时间 | 纯化12个样品需1小时 | 纯化1个样品需1小时 |
精彩文章鉴赏:
CP40 from Corynebacterium pseudotuberculosis is an endo-β-N-acetylglucosaminidase.BMC Microbiology. 2016.
Proteome of Human Calcium Kidney Stones.Urology.2010.
Norgen Biotek成立于1998年,公司总部位于加拿大,是一家著名全球化生物技术公司,生产基于专利技术的核酸和蛋白质纯化及富集产品用于研究和诊断。Norgen Biotek 在2003年获得加拿大国家研究委员会颁发的科技创新奖,是一家致力于样品制备并获得ISO 9001(产品质量)、ISO 13485(产品可用于商业化的医疗设备,包括用于体外诊断领域)和ISO 15189(可用于临床检测机分子诊断领域的研发能力)认证的生物科技公司。目前该公司的产品多达700余种,提供一流的样品制备试剂盒,应用于基因组和蛋白组等不同的领域。
艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Mabtech、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
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