ImmunoChemistry FLIVO探针助力活体(in vivo)凋亡检测方案

       关于细胞凋亡的检测产品，市面上屡见不鲜，但是大部分都是针对体外（in vitro）细胞的，活体(in vivo)细胞的凋亡检测却不多见。ImmunoChemistry Technologies（简称“ICT”）的FLIVO系列产品，能够用于细胞凋亡活体检测。

       FLIVO(FLuorescence in vIVO)探针是细胞渗透性、无毒性的天冬氨酸蛋白酶(Caspases)荧光抑制剂，含有缬氨酸－丙氨酸－天冬氨酸(VAD)氨基酸序列，该序列是活性Caspase的靶点,夹在荧光标记和氟甲基酮(FMK)之间。静脉注射后，FLIVO通过体循环，在细胞中不断扩散。如果细胞内存在活性Caspase，FLIVO将与Caspase上的半胱氨酸形成不可逆的共价键。因此只要细胞膜完好，结合的FLIVO探针就会留在细胞内，从而被标记上荧光，未结合的FLIVO则在动物的体循环中被清除，动物体内剩下的信号就是对caspase活性的直接测定。所以FLIVO可以用于检测活体动物体内Caspase介导的细胞凋亡、焦亡。FLIVO非常敏感，自然发生的低水平细胞凋亡也会被检测到。  

       ICT可提供FLIVO试剂盒和示踪剂,包含的FLIVO探针由荧光基团、VAD序列和氟甲基酮(FMK)组成夹心结构，荧光基团用来检测荧光，VAD序列是活性caspase靶点，FMK有助于与活性caspase形成共价键。  

       FLIVO体内（in vivo）天冬氨酸蛋白酶(Caspases)活性检测试剂盒

       利用FAM-FLIVO监测细胞死亡，健康神经元和凋亡神经元之间有明显的区别。在对糖尿病的活体动物大脑研究中，对照大鼠(左)和8周STZ糖尿病大鼠(右)的caspase活性来评估神经退行性变。在大鼠死亡前30分钟静脉注射FAM-FLIVO(货号#981)，直接标记caspase阳性凋亡神经元。死亡后，制备20um冰冻切片的导水管周围灰质(PAG)，用红色荧光Nissl反染色，以识别所有神经元。濒死的凋亡神经元(左)显示FAM-FLIVO(黄/绿色)和Nissl(红色)双重染色。在该模型中，糖尿病动物导水管周围灰质中caspase活性水平高于对照组动物。 

       FLIVO示踪剂

       * 仅供科研使用，不得用于医疗. 

       在小鼠脑内接种活金黄色葡萄球菌后诱发脑脓肿。动物在感染后17小时静脉注射NIR-FLIVO 690示踪剂(货号#9112)或NIR-FLIVO 690游离染料对照剂(货号#9113)，然后在1小时后使用IVIS?Spectrum?从离体大脑组织中获得信号。在注射NIR-FLIVO 690示踪剂(右图)后，强烈的caspase活性与脑脓肿相关，而在注射NIR-FLIVO 690游离染料对照剂(左图)的动物中检测到极少的信号。 

       使用CRi Maestro?成像系统，使用NIR-FLIVO 747示踪剂(货号#9114)对小鼠肿瘤模型中的凋亡组织进行体内成像。NIR-FLIVO 747示踪剂用于无创监测一种实验性抗癌治疗的疗效和时间动力学。在接受安慰剂或实验治疗后，阴性对照小鼠(左图)和实验治疗小鼠(右图)静脉注射NIR-FLIVO 747示踪剂，并在不同时间点使用CRi Maestro?成像系统进行无创成像。实验组被试的凋亡肿瘤组织呈亮蓝色荧光，表明实验治疗有凋亡效应。  

       FLIVO探针的活体使用对药物测定研究很有价值，因为通过活体动物的荧光成像可测定药物反应性所引起的凋亡水平升高或降低。凋亡水平的升高使得粘附的探针更多，因此荧光强度增加。此外，活体技术避免了从动物上取出细胞和组织的需要，这会进一步诱导凋亡。    

       美国ICT除了可提供全面的细胞活性检测相关试剂，包括凋亡、 caspase、 自噬、细胞毒性、坏死等相关检测，还可以同时提供高质量高灵敏度的 ELISA以及相关试剂，包括包被液、封闭液、 冲洗液、 底物、 终止液、 板子等等。    

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