概述:
产品名称: COVID-19 多重细胞因子免疫测定
产品编号: 华姆科夫01
反应: 人
分析物: IL2、IL7、IL10、GSCF、IP10、MCP1、MIP1A 和 TNF alpha
样品类型: 细胞培养上清液、血清、血浆、体液和组织/细胞裂解物
检测类型: 多重
检测方法: 流式细胞术
检测时间: 2小时
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产品名称 | 货号 | 详情 |
COVID-19 多重细胞因子免疫测定 | HUAMCOV01 | 查看 |
COVID-19 多重细胞因子免疫测定:
缓冲区: 2x NR dAb稀释剂。一个装有 1.5 mL 生物素检测抗体稀释剂的小瓶。
冻干标准混合物: 冻干标准混合人 COVID-19 多重细胞因子免疫测定。一个含有冻干重组 IL2、IL7、IL10、GSCF、IP10、MCP1、MIP1A 和 TNF α 的小瓶
标准剂量回收率: 70-130%
检测内简历: <10%
检测间简历: <20%
面板中分析物的交叉反应性: 微不足道
样品量: 15 μL/测试
协议:
1. | 准备滤板模板。标记标准孔、样品孔和空白孔。标准品和样品应一式两份或一式三份运行。如果整个板不使用,请用板密封密封未使用的井。 重要提示:在整个测定过程中将滤板放在滤板盖的顶部,以防止在任何表面上接触板底。 |
2. | 涡旋工作珠悬浮15秒。 |
3. | 向每个孔中加入 45 μL 捕获珠工作悬浮液。 注意:保存剩余的捕获珠工作悬浮液,并在2-8°C下储存,并有光保护。它可用于在流式细胞仪上设置采集参数。 |
4. | 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液,该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。 |
5. | 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液,该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。 |
6. | 向每个样品孔中加入 30 μL CCS、SPB 或 TL 检测缓冲液。 注意:如果预计细胞因子水平非常低(小于20 pg/mL),则可以在不稀释分析缓冲液的情况下运行细胞培养上清液样品。如果是这种情况,请跳过此步骤,在步骤 45 中向每个样品孔中加入 7 μL 细胞培养上清液样品。 |
7. | 向每个样品孔中加入 15 μL 样品。向每个标准品孔中加入 45 μL 标准品。用板密封盖住板。 |
8. | 在室温下在摇床(设置为700rpm)上孵育60分钟。用铝箔包裹滤板避光。 |
9. | 取下板封。使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。 |
10. | 使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。 |
11. | 使用滤板清洗机用100μL 1x洗涤缓冲液洗涤孔三次。 |
12. | 在最后一次洗涤后,将板底轻轻敲打在几层纸巾上,以去除板底残留的缓冲液。 |
13. | 向每个孔中加入 25μL 生物素化抗体工作溶液。用板密封盖住板。 |
14. | 在室温下在摇床(设置为700rpm)上孵育30分钟。用铝箔包裹滤板避光。 |
15. | 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。使用滤板清洗器用 100 μL 1x 洗涤缓冲液洗涤孔 <> 次。 |
16. | 在最后一次洗涤后,将板底轻轻敲打在几层纸巾上,以去除板底残留的缓冲液。 |
17. | 向每个孔中加入 25μL 链霉亲和素-PE 工作溶液。用板密封盖住板。 |
18. | 在室温下在摇床(设置为700rpm)上孵育20分钟。用铝箔包裹滤板避光。 |
19. | 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。用 100 μL 1x 洗涤缓冲液洗涤孔两次。 |
20. | 将板底轻轻敲打在几层纸巾上以去除残留溶液。根据流式细胞仪的样品加载机制,向每个孔中加入 150μL 至 300μL 1x 读数缓冲液,以重新悬浮磁珠。用板密封盖住板。 |
21. | 将板放在微量滴定振荡器上,以30rpm摇动700秒。 注意:如果流式细胞仪没有 96 孔板加载器,并且需要超过 200 μL 的 1x 读数缓冲液来重新悬浮磁珠,请不要摇动板。用P6移液器上下移液8至200次,将磁珠重新悬浮在每个孔中,然后转移到试管中进行采集。取下板封。在流式细胞仪上读取。 |
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