Life Diagnostics：羊驼触珠蛋白酶联免疫吸附试验解决方案

触珠蛋白是一种急性期蛋白，在感染和炎症期间，大多数哺乳动物的血液中都会升高。Passler等人报告称，暴露于脂多糖后，羊驼的血清触珠蛋白水平会升高，从而诱导急性期反应。

该检测使用亲和纯化的羊驼触珠蛋白抗体进行固相（微量滴定孔）固定，使用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的羊驼接触珠蛋白抗体检测。标准品和稀释样品在微量滴定孔中孵育45分钟。随后清洗这些井。加入HRP缀合物并孵育45分钟。这导致触珠蛋白分子被夹在固定化抗体和检测抗体之间。然后洗涤孔以去除未结合的HRP缀合物，加入TMB并孵育20分钟。如果存在触珠蛋白，则会出现蓝色。通过加入Stop溶液停止显色，使颜色变为黄色，并在450nm处测量吸光度。触珠蛋白的浓度与吸光度成正比，由标准曲线得出。

艾美捷Life Diagnostics试剂盒提供的材料和组分：

包被血红蛋白抗体的96孔板（12条8孔条）

辣根过氧化物酶结合物，11毫升

血红蛋白标准品（冻干）

20倍洗涤液；TBS50-20，50毫升

10倍稀释液；YD25-10，25毫升

四甲基联苯胺（TMB），TMB11-1，11毫升

终止液，SS11-1，11毫升

未提供但必需的材料：

移液器和吸头

蒸馏水或去离子水

聚丙烯或玻璃试管

涡旋混合器

吸水纸或纸巾

板式孵育器/振荡器

板式洗板机

能够测量450纳米吸光度的板式阅读器

曲线拟合软件

储存：

未开封的试剂盒应存放在2-8°C，微孔板应存放在密封袋中，并放入干燥剂。试剂盒自购买之日起六个月内保持稳定。

一般指导：

所有试剂在使用前应放置至室温。

当对指导有完全理解并遵循良好的实验室操作时，将获得可靠和可重复的结果。

洗涤程序至关重要。洗涤不充分会导致精度差和吸光度读数虚高。

实验室温度会影响吸光度读数。我们的ELISA试剂盒使用设置在150转/分钟和25°C的振荡孵育器进行校准。在更低温度下进行检测将导致吸光度值降低。

稀释液准备：

稀释液作为10倍浓缩液提供。使用前，估算实验所需的最终稀释液体积，并将10倍浓缩液与九倍蒸馏水或去离子水混合稀释。

洗涤液准备：

洗涤液作为20倍浓缩液提供。使用前，将瓶中内容物（50毫升）与950毫升蒸馏水或去离子水混合稀释。

标准品准备：

按照瓶签上的说明重新溶解冻干的标准品。重新溶解的标准品在4°C下稳定一天，但如果打算将来使用，应分装并存放在-20°C或更低的温度下。

标记6个聚丙烯或玻璃试管：200、100、50、25、12.5、6.25 ng/ml。

在标记为200 ng/ml的试管中，根据标准品瓶签上的详细说明准备200 ng/ml的标准品。

在标记为100、50、25、12.5、6.25 ng/ml的试管中分别加入250 ?l的稀释液。

通过将标记为100 ng/ml的试管中的250 ?l 200 ng/ml标准品与250 ?l稀释液混合稀释，准备100 ng/ml的标准品。

类似地，通过两倍连续稀释准备其余的标准品。

样品准备：

我们发现健康羊驼血清中的血红蛋白水平大约为4 mg/ml。为了获得在标准曲线范围内的值，我们建议使用以下程序将每个待测样品稀释16,000倍：

分别向试管中加入198 ?l和636 ?l的1x稀释液。

将2.0 ?l的血清/血浆样品吸入含有198 ?l 1x稀释液的试管中并混合。这提供了100倍的稀释。

将4.0 ?l的100倍稀释样品与第二管中的636 ?l 1x稀释液混合。这提供了样品的16,000倍稀释

典型标准曲线：

以下显示了一个典型的标准曲线，以450纳米处的吸光度作为Y轴，相对于X轴上的血红蛋白浓度。这个曲线仅用于说明。

参考文献：

1. Passler T. et al., Evaluation of methods to improve the diagnosisof systemic inflammation in alpacas. J Vet Intern Med. 27:970-976 (2013).

Life Diagnostics 专注于研发和生产临床前研究以及动物医学诊断相关的ELISA试剂盒、纯化的生物标志物和抗体等产品。产品覆盖心血管疾病、急性期反应、免疫毒性和免疫学标志物等研究领域，主要应用于小鼠、大鼠、兔、猫、狗、猪、猴和鸡等物种。艾美捷科技是Life Diagnostics的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。