鸟苷酸交换因子（GEF）活性检测工具，实验省心又省力

小G蛋白的共同特点是，当结合了GTP时即成为活化形式，这时可作用于下游分子使之活化，而当GTP水解成为GDP时（自身为GTP酶）则恢复到非活化状态（分子开关），正常情况下，在细胞中，小G蛋白会在跟GDP结合的“关闭状态”和 GTP 结合的“开启状态”之间循环，这种循环过程主要由细胞内的小G蛋白调节因子来控制，胞内小G蛋白调节因子主要有两类：一类是可以增强小G蛋白的活性的鸟苷酸交换因子（guanine nucleotide exchange factor, GEF），另一类是可以降低小G蛋白活性的GTP酶活化蛋白（GTPase activating protein, GAP）。

今天我们就主要来聊一聊小G蛋白活性增强剂——鸟苷酸交换因子（GEF），GEF 是通过催化其目标 GTPase上的核苷酸交换来发挥作用，GEF与核苷酸结合的 GTPase 结合，这会导致结合的核苷酸被释放，从而产生不含核苷酸的GEF-GTPase 反应中间体。这种不含核苷酸的复合物随后将结合新的核苷酸，然后GEF再从GTPase 中释放出来。

由于GEFs对GDP-GTPases的亲和力高于对相应GTP-GTPases的亲和力，在正常细胞中GTP和GDP比率约为10:1，GEFs将推动从GDP-GTPases到GTP-GTPases的转换。

在这里小艾给大家带来一款独一无二的GEF活性检测试剂盒，这是一款基于荧光法的检测GTP酶上的核苷酸转换的试剂盒，可适用于常规的96孔格式或高通量384孔格式。

该试剂盒包含检测所需的所有试剂：

1.Exchange Buffer

2.His标签 Cdc42蛋白

3.His标签 Rac1 蛋白

4.His标签 RhoA 蛋白

5.His标签 hDbs 蛋白（作为 Cdc42 和 RhoA 的GEF的阳性对照 ）

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

检测原理：该试剂盒是通过检测荧光核苷酸类似物 N-甲基邻氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）对 GTPase 的结合情况来检测GEF的活性的。一旦mant-GTP与 GTPase 结合， mant-GTP的荧光强度（Ex：360 nm，Em：440 nm）显著增加，通过检测游离的mant-GTP和GTPase 结合的 mant-GTP 之间的荧光值差异，即可检测样本中GEF的活性。

本试剂盒的主要用途和应用:

1. 测定未知GEFs活性；

2. 小GTPases及其相关GEFs的生化特性表征；

3. 研究不同辅助因子或蛋白结构域对GEF活性的调控；

4. 筛选GEFs或GTPases突变蛋白的活性和底物特异性；

5. HTS(高通量筛选)筛选鉴定GEF抑制剂。

检测结果展示：

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用BK100发表的部分引文赏析：

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