荧光细胞膜显微镜的鳍状肢-TR 试剂盒,Flipper TR,Cytoskeleton

Flipper TR是一种荧光探针，专门针对细胞质膜，并通过其荧光寿命变化报告膜张力变化。它是Flipper探针家族中最先进的成员，2，3），通过机械载体的两个扭曲的二噻吩噻吩之间的扭曲角和极化的变化来感知脂质双层膜组织的变化。Flipper TR会自发地插入细胞的质膜中，当插入脂质膜时，它只会发出荧光。它具有广泛的吸收和发射光谱，通常可以用488nm激光激发，而发射在575和625nm之间。Flipper TR可用于多种生物，包括细菌、酵母、哺乳动物和植物。

作为Cytoskeleton全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品荧光细胞膜显微镜的鳍状肢-TR 试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。   

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。

储存： 

收到探头后，将其储存在-20°C。使用新的无水DMSO制备探针溶液（因为旧的和湿的DMSO会大大缩短探针的保质期）。使用后将探头溶液储存在-20°C。打开小瓶前，应将其加热至室温。妥善储存后，溶液中的探针应稳定3个月。注意：处理DMSO溶液时应特别小心，因为DMSO有助于有机分子进入组织。按照所有相关的当地法规处理这些试剂。 

注：该方案使用粘附在盖玻片上的HeLa细胞进行了优化，并已在其他常见细胞系中得到证实。应将实验方案的建议作为起点，并根据经验确定每种细胞类型的最佳标记条件。  

制备1mM储备溶液 

将Flipper TR小瓶的内容物溶解在50μL无水DMSO中，制成1mM储备溶液。该溶液应储存在-20°C或更低的温度下。不要将溶液分成小份，它们会更快地腐烂，并且化合物不会被多次冻融循环改变。如果储存得当，该储备溶液应稳定三个月。（可选）如果需要准确测定储备溶液的浓度，稀释1?l 1mM储备溶液，99?l二甲基亚砜。在425 nm处测量吸光度。使用上述消光系数计算浓度。   

准备染色溶液 

将Flipper TR稀释至所需浓度（从1开始?M） 在应用于细胞之前不久在细胞培养基中（使用前不要将染色溶液保持超过2小时）。注：当使用含有胎牛血清（FCS）或其他血清的细胞培养基时，与没有血清的培养基相比，标记效率可能会降低。像往常一样，在盖玻片、玻璃底皿或玻璃底多孔板上培养细胞。当细胞达到所需密度时，用染色溶液替换培养基，确保所有细胞都被溶液覆盖。成像前，将细胞置于37°C、含5%CO2的湿润环境中的培养箱中15分钟。30分钟或更长时间后，由于膜翻转，可以看到内体结构的标记。   

然而，含有细胞器（内质网、高尔基体）的细胞是有限的。内体结构通常具有较低的寿命。任选地，可以去除含有探针的培养基，并在新鲜培养基中洗涤细胞一次。由于探针仅在膜中是荧光的，因此不需要移除探针，特别是在计划长期成像（>24h）时培养基含有血清的情况下。   

使用485或488nm脉冲激光通过600/50nm带通滤波器激发和收集光子，用标准FLIM显微镜对细胞成像。我们建议优化标记程序以及图像采集设置，以最小化488nm激发光在活体样品上引起的光损伤。为了提取寿命信息，将ROI或单个像素的光子直方图（累积足够的计数以确保良好的统计）与双指数和两个衰减时间进行拟合，?1和?2被提取。具有更高拟合振幅的最长寿命?1用于报告膜张力，在2.8和7.0纳秒之间变化。更长的寿命意味着膜中的张力更大。?2具有较小的值（在0.5和2ns之间）和较小的拟合振幅不太适合研究膜张力。使用参考文献1中给出的校准程序，可以将寿命与绝对膜张力相关。 

使用荧光细胞膜显微镜的鳍状肢-TR 试剂盒重要注意事项：

-膜张力测量只能通过FLIM显微镜进行，荧光强度或波长不能可靠地报告膜张力。

-脂质组成随时间变化的系统也可能导致Flipper TR寿命的变化。

-FLIM成像是一种先进的显微镜技术，需要商业化或定制的FLIM显微镜系统，具有足够的激发激光器、光子计数系统和发射滤波器。建议客户咨询仪器负责人或联系显微镜制造商，以确保其系统能够对Flipper TR荧光和寿命进行成像。   

相关文献：

1)Colom A, et al: A fluorescent membrane tension probe. Nat Chem, 2018, 10:1118–1125. 

2)Dal Molin M, et al: Fluorescent flippers for mechanosensitive membrane probes. JACS, 2015, 137:568-571. 

3)Soleimanpour S, et al: Headgroup engineering in mechanosensitive membrane probes. Chem Commun (Camb) 2016,52:14450-14453.    

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。