T细胞和B细胞ELISPOT：评价疫苗有效性的金标准

      事实：能使人生病的细菌、病毒等病原体几乎无处不在，我们的身体无时无刻不处在病原体的包围之中，但是通常情况下，我们并没有感到不适。这是因为我们有着强大的免疫系统。

       人体的免疫系统是一个复杂又神奇的存在，既能帮助人体有效抵御病原体的侵害，又能维持平衡不攻击正常的人体细胞，人体免疫包括非特异性免疫和特异性免疫，其中特异性免疫简单来说又分为体液免疫（B 细胞主导，通过分泌抗体来起作用）和细胞免疫（T细胞主导，通过分泌细胞因子来起作用）。在免疫反应中，CD4+T细胞具有激活B细胞和CD8+T细胞的功能，B细胞主要产生中和抗体，而CD8+T细胞主要在细胞免疫中通过分泌细胞因子来起作用，并产生记忆B细胞和记忆T细胞。机体产生的中和抗体主要抑制病毒的进一步感染，细胞免疫则主要对抗临床症状。

      疫苗即是通过诱导体液免疫和细胞免疫达到预防相应传染病的目的。因此，中和抗体和细胞免疫也是病毒疫苗有效性评价中非常重要的指标。那么哪种方法可以评估疫苗引起的体液免疫和细胞免疫呢？ELISPOT可以给你答案：

     酶联免疫斑点检测（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）是将细胞培养技术和ELISA技术相结合，可以原位地检测培养细胞体外分泌蛋白的高灵敏分析技术。根据技术原理，主要分为T细胞与B细胞ELISpot两种。其中T细胞ELISpot主要用于检测刺激后细胞所分泌的痕量细胞因子，而B细胞ELISpot主要用于检测抗体分泌B细胞的频率。

       B细胞的ELISpot

      A：将特异性抗原包被在培养孔底部捕获IgG，用生物素偶联的抗体进行检测；

      B：使用抗IgG的抗体进行包被，用生物素偶联的抗原进行检测；

      C：总的IgG的检测方法：使用抗IgG的抗体进行包被，再使用生物素偶联的抗体进行检测。

      B细胞ELISpot用于研究抗体分泌细胞的应答反应，主要包括感染后以及疫苗接种后应答反应的研究。目前，B细胞ELISpot是仅有几个能够直接关注抗体分泌细胞（ASCs）的检测工具之一，而其他的分析方法多为检测液体中游离的抗体。相比于其他检测方法，研究人员借助B细胞ELISpot可以更准确地识别出样本中的ASCs，并测定出其数量及针对特异性抗原分泌的抗体数量。

       T细胞的ELISpot

将特定指标的抗体包被在培养孔底部捕获对应细胞因子，用生物素偶联的抗体进行检测

      T细胞ELISpot广泛应用于细胞介导的免疫应答研究，如传染性疾病，癌症，过敏症以及自身免疫性疾病的研究中，并且T细胞ELISpot也被视为为检测和评价疫苗 有利的研究工具之一。在疫苗治疗前后，如何准确的定性，定量判断抗原特异性T细胞反应，评价疗效是疫苗发展的关键。例如，Th1细胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，Th2细胞主要分泌IL-4，IL-5以及IL-13。借助ELISpot测定疫苗治疗前后T细胞应答反应的细胞因子表达量变化来进行疫苗评价。

       ELISPOT技术优势

      ① 灵敏度高。在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。这是目前为止，最为灵敏的检测技术，灵敏度比传统的ELISA方法高2-3个数量级。

      ② 单细胞水平。ELISpot检测的是单个细胞分泌，而非细胞群体的平均分泌。

      ③ 功能学检测。ELISpot检测到的细胞因子不是在细胞正常状态下就存在的，而是在检测的过程中活细胞收到刺激物的刺激后分泌出来的。斑点的强弱和数量直接反映了细胞对刺激物的反应能力和分泌细胞因子的能力。

      ④ 直观、可信度高。结果直观，一个阳性细胞对应一个斑点。

      Mabtech公司提供的B细胞ELISpot检测指标包括人，非人灵长类，小鼠，牛、猪等种属的IgG，IgA，IgM以及IgE，下表仅列出人的做为参考，其他种属的B细胞ELISpot检测指标，详询艾美捷科技。

      当然， Mabtech作为ELISpot、FluoroSpot和ELISA等免疫学相关研究的领导者，除了可以提供以上B细胞ELISpot检测指标，还可提供最全的T细胞ELISpot检测指标: 白细胞介素IL（扒一扒白细胞介素（Interleukin）的家族秘密）、肿瘤坏死因子TNF（Mabtech肿瘤坏死因子-α的产品大集合啦）、干扰素IFN（IFN-γ ELISpot法：有效评估疫苗引起的细胞免疫效应）等，更多细胞因子的ELISpot检测指标，详询艾美捷科技。

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