ELISA法&qPCR法，双管齐下——慢病毒滴度检测

【前情回顾】慢病毒包装Protocol大放送

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，基因组为双链RNA。慢病毒载体可以将外源基因有效整合到宿主染色体，从而达到持久性表达，区别于一般的逆转录病毒，慢病毒具有更广的宿主范围，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，对于较难转染 的多种细胞如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞、 非分化细胞等，均能极大提高目的基因的转导效率，具有广阔的应用前景。前面我们给大家详细的介绍过慢病毒包装的过程，今天我们再给大家细说一下在慢病毒包装、感染过程中不容忽视的慢病毒效力指标——慢病毒滴度。

那么什么是病毒滴度呢？就像重组蛋白合成以后需要检测纯度一样，病毒包装后的效力如何，如何定量，也是必须要检测的，专业术语称为：病毒滴度的测定。慢病毒滴度是用于评估转导一定数量靶细胞所需要的病毒数量，即每升溶液中含有的病毒数量。转导单位(TU)即能够感染并整合到细胞内的病毒载体基因组。常规生产的病毒的滴度在2x10E8TU/ml之间。所以，在慢病毒研究过程中，有效实现病毒滴度的检测显得尤为重要。下面我们就来聊下几种常见的慢病毒载体滴度的检测方法。

1.ELISA法检测病毒滴度

p24蛋白是慢病毒外壳中含量最大的标志性蛋白。p24 ELISA法测量病毒上清液中p24衣壳蛋白的量，然后将p24的含量水平与病毒滴度关联起来。Cell Biolabs提供的基于慢病毒p24蛋白的ELISA分析分两种，一种称为传统的p24蛋白ELISA检测（Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA)），能检测所有p24蛋白，从而实现对病毒滴度的定量，可检测1 ng/mL HIV p24蛋白，最后分光光度计读取数据。但是由于这种传统的p24 ELISA 法能检测所有p24蛋白，所以病毒滴度会偏高。同时Cell Biolabs提供的新的Lentivirus Titer Kit(Lentivirus-Associated HIV p24)能分离出包装细胞产生的游离p24蛋白，只检测病毒颗粒表面的p24，因此实验数据更真实准确，可检测1 ng /mL HIV p24蛋白，最后分光光度计读取数据。

传统的p24 ELISA可检测到293细胞在瞬时转染过程中产生的病毒相关p24和游离p24，而游离的p24可以占上清液中p24总量的很大一部分。因此，传统的p24 ELISA通常会高估存在的慢病毒的数量。新的QuickTiter慢病毒滴度试剂盒（与慢病毒相关的HIV p24）可最大程度地减少此问题。一项专有技术可在运行测定的ELISA部分之前，将慢病毒与溶液中的游离p24分离。

传统的p24 ELISA法

新的p24 ELISA法

2.Real-time PCR法检测病毒滴度

利用基于SYBRGreen的荧光定量PCR方法，PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析，根据相应公式计算慢病毒滴度。

GeneCopoeia提供的Lenti-Pac?慢病毒滴度检测试剂盒系列产品为简便、快速检测慢病毒颗粒的滴度而设计。试剂盒包含从RNA抽提到qRT- PCR检测过程的全套试剂，样品经过RNA抽提、DNase消化、反转录、qRT-PCR步骤即可确定慢病毒滴度。

Lenti-Pac?慢病毒滴度检测试剂盒产品优势：

能够判断慢病毒是否包装成功；

准确测定病毒拷贝数，以确保细胞转导和基因表达的效率；

提供滴度检测过程从病毒的RNA提取到qPCR检测所需要的试剂。

慢病毒滴度检测：ELISA法&qPCR法，双管齐下，想怎么测就怎么测！

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