DiI, DiO, DiD 和 DiR细胞膜荧光探针怎么选？

Di系列细胞膜荧光探针想必大家一定不陌生，我们做细胞膜染色的时候经常会用到，今天给大家介绍下常见的4类Di细胞膜荧光探针：DiI, DiO, DiD 和 DiR，Di系列染料是一类环境敏感型亲脂性膜染料，这类探针在进入细胞膜之前荧光非常弱，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质）结合时，其荧光强度显著增强。一旦应用于细胞中，这类染料会在细胞内质膜中逐步扩散，在其最佳浓度条件下，可以扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激发后可以发出不同颜色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。

DiO、DiI、DiD、DiR细胞膜荧光探针的光谱图

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种细胞膜荧光探针的异同：

其中I、D、R分别代表了一个，两个，三个双键，它们是决定波长长度的关键，DiO, DiI, DiD 和 DiR这几款细胞膜荧光探针的结构式如下：

DiO高氯酸盐结构式	Dil高氯酸盐结构式
DiD高氯酸盐结构式	DiR碘化物结构式

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种细胞膜荧光探针的异同：

细胞膜荧光探针产品优点：

1. 应用广泛：主要作用是标记细胞膜，用于活的或固定的神经元等细胞或组织的长期示踪剂，同时还可以标记其他疏水结构，例如外泌体

2. 不会影响细胞的生存力

3. 体外培养的条件下可以存活很长时间

4. 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6mm/day

关于细胞膜荧光探针的使用技巧：

1.DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度约为 1-2.5mg/ml，发现较难溶解时可以适当用超声处理以促进溶解。

2.用于细胞膜荧光标记时，DiI 的常用浓度为 1-25μM，最常用的浓度为 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为 5-20 分钟。

4. 染固定的细胞时，通常使用 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

Di家族细胞膜荧光探针选择小tips：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR（D12731）波长更长，更适合组织染色；

DiR应用实列赏析：

源文献：Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model Journal: Scientific Reports (2017)

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