Cas9蛋白定量检测试剂盒解决方案

CRISPR/Cas是机体长期进化形成的RNA指导的降解入侵病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统。根据Cas基因核心元件序列的不同，CRISPR/Cas免疫系统被分为3种类型：I型、Ⅱ型和Ⅲ型。I型和Ⅲ型CRISPR/Cas免疫系统需要多个Cas蛋白形成复合体切割DNA双链，而Ⅱ型CRISPR/Cas免疫系统只需要一个Cas9蛋白来切割DNA双链，目前Ⅱ型系统是被改造的最为成功的人工核酸酶。

Ⅱ型CRISPR/Cas免疫系统以Cas9蛋白和向导RNA为核心，其中Cas9蛋白是一种DNA内切酶，当短链外源DNA整合在CRISPR基因组中，转录加工成CRISPR RNA（CrRNA），这些CrRNA参与反式调控激活CrRNA（tracrRNAs），指导Cas9蛋白特异性位点剪切DNA。然而，最近有研究发现，这两种RNA可以被“改装”成一个向导RNA（single-guide RNA，SgRNA）,可引导Cas9蛋白正确识别并切割特定序列，为CRISPR-Cas9基因编辑技术广泛应用奠定基础。因此，Cas9 蛋白作为一种基因组编辑工具在 DNA 中引起定点双链断裂，受到了全世界的关注。

如何快速有效的实现Cas9蛋白的定量检测，作为专业的生命科学医药原料供应商，Cell Biolabs中国区金牌代理，艾美捷科技为您推荐：Cas9蛋白ELISA检测试剂盒，实现Cas9蛋白的定量检测。

Cas9蛋白ELSIA定量检测试剂盒实验结果：

图1. Cas9标准曲线

图2. 在转染的293细胞中检测Cas9。用Cas9哺乳动物表达载体瞬时转染细胞。48h后，细胞在RIPA缓冲液中裂解，测定Cas9蛋白浓度。用Cas9 ELISA试剂盒分别检测无细胞裂解液样本 (Neg)、存在50ng/mL Cas9蛋白(Pos)样本、转染对照(mock转染)蛋白裂解液以及Cas9转染的裂解液。

图3. 纯化的重组Cas9蛋白：泳道1：SeeBlue Plus2 MW标准品；泳道2：重组的Cas9。纯化的重组Cas9蛋白用作免疫原以产生ELISA抗体。

重组的Cas9蛋白的序列（下划线部分是Cas9蛋白全长）：

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSEFELRRQACGRMDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITD EYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMA KVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALA HMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIA QLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKN LSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYI DGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYP FLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFD KNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKED YFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLT FKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQ KGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVD HIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGG LSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKV REINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIM NFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESIL PKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPI DFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKG SPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTL TNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGSGPPKKKRKVYPYDVPDYAC

最新引用文献：

1、Van Cleemput, J. et al. (2021). CRISPR/Cas9-Constructed Pseudorabies Virus Mutants Reveal the Importance of UL13 in Alphaherpesvirus Escape from Genome Silencing. J Virol. 95(6):e02286-20. doi: 10.1128/JVI.02286-20.

2、Lee, M.H. et al. (2021).  Cellular reprogramming with multigene activation by the delivery of CRISPR/dCas9 ribonucleoproteins via magnetic peptide-imprinted chitosan nanoparticles. Mater Today Bio. 9:100091. doi: 10.1016/j.mtbio.2020.100091.

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