Blasticidin S，杀稻瘟菌素S（灭瘟素）

      Blasticidin S杀稻瘟菌素S（灭瘟素）是一种多肽核苷类抗生素。它首先从S.griseochromogenes中分离出来。利用衍射仪数据确定了五水合物形式的结构，与抗生素阿米西汀相似，亲水和疏水基团位于分子的两侧。此后利用全合成法创造了它。在研究中，Blasticidin S用于筛选携带有bsr或BSD耐受基因的转染细胞。杀稻瘟菌素具有快速而强效的作用模式，很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。

      目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种，一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基转移酶基因bls，另外两种是脱氨酶基因，包括从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。Bsr和 BSD 基因是最常用的筛选标志，用于哺乳动物和植物细胞的基因转移实验，也可用于E.Coli。

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       1）Escherichia coli应用浓度

      Ecoli对Blasticidin S的敏感性稍差，但是转化子对Blasticidin S具有耐受性，可以用低盐LB培养基（pH 8）进行筛选，浓度范围为50-100 ug/mlBlasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

       2）哺乳动物细胞，应用浓度

      哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 ug/ml（通常为10 ug/ml）。初次实验建议通过灭杀曲线来确定最佳使用浓度。一些哺乳动物细胞的建议工作浓度：

      操作步骤（哺乳动物稳转株筛选）

      1）转染后48h，用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代（注：细胞处于活跃分裂期时抗生素工作最好。细胞密度太高，抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率最好不超过25%）。

      2）每3-4天去除培养基，加入含抗生素的新鲜培养基。

      3）7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率，集落形成可能需要增加一周或更久。      

      4）转移5-10个耐受克隆到35 mm细胞盘中，加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。

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