VitroGel STEM，更加简单和高效的细胞收获方案

VitroGel STEM与大多数hPSC培养基和组织培养器皿兼容。由于D特的静态悬浮培养方案，在大型生物反应器中使用时不需要微载体，从而使细胞收获更加简单和高效。使用VitroGel STEM 培养的 3D hPSCs细胞团可用于进一步的传代培养、分化或重新建立 2D 培养形态。

艾美捷VitroGel STEM 参数：

货号：VHM02

配方：无异种成分，功能性水凝胶

用途：用于人类多能干细胞的三维静态悬浮培养

操作：室温下即用型

细胞收获：VitroGel组织球回收溶液

5-15分钟细胞恢复

pH值：中性

储存：在2-8°C下储存，常温运输

规格：10毫升和2毫升

初始静态悬浮培养方案：

推荐的材料和试剂

VitroGel STEM

hPSCs培养基（mTeSR-PLUS、StemFlex、mTeSR-1、Essential 8、NutriStem hPSC 等）

Y-27632 （10 mM/mL）

VitroGel Cell Recovery Solution（cat#MS03-100）（可选）

40、70 或 100 μm 可逆过滤器 （可选）

细胞消化液 （可选）

锥形离心管 （15 mL 或 50 mL）

血清移液器

细胞培养器皿（孔板、T培养瓶、锥形培养瓶）

注意：VitroGel STEM与各种培养器皿兼容，在静态悬浮培养中培养hPSCs。根据所需的培养规模和每个实验室的可用系统，可能需要针对单独的细胞类型优化培养体积。

设备：

生物安全柜（ II类）

CO2 培养箱（37℃、5% CO2 和 95% 湿度）

离心机

移液器

定轨摇床、旋转瓶或生物反应器，低速 10-40 rpm （可选）

VitroGel STEM的培养周期：

①7 天培养周期，第 3/4 天增加培养基

②3 天/4 天培养周期，无需额外培养基

操作指南：

1.从 2D包被凝胶表面收获的hPSC; 或直接使用液氮冻存的细胞。（离心得到细胞沉淀以除去细胞消化液或细胞冷冻液）。

2.在含有10μm/mL Y-27632的hPSCs培养基中制备细胞悬液。建议细胞密度为0.2-5×106个/ mL，用于水凝胶悬浮培养的最终细胞密度约为0.1-5×105个/ mL。

如果需要，可通过小心地上下吸取悬浮液，将细胞团打散到30-70μm的大小。不建议使用单细胞悬液。

根据所需的培养条件和hPSCs细胞团的最终尺寸，应针对单独的细胞类型优化细胞接种密度。

3.以2：1的体积比例轻轻地将VitroGel STEM与细胞团悬液混合（例如，将2mL的VitroGel STEM与1mL的 细胞团悬液混合。

4.以5：1的体积比例将hPSCs培养基（可选：10μm/mL Y-27632）添加到细胞-水凝胶混合物中（例如，将15 mL hPSCs培养基与3 mL细胞-水凝胶混合物混合）。小心地上下吸取，使培养基和混合物均匀混合。

hPSCs培养基和细胞-水凝胶混合物的混合体积比例可以在1：1至20：1之间调节，具体取决于最终混合物所需粘度和培养条件。如果混合体积比高于 5：1，则可能需要定轨摇床或旋转瓶，并将其设置为10-40rpm的速度以维持细胞悬液。

5.将所需体积的混合物加入培养器皿中，并在含有5% CO2的37℃环境中孵育。

7天的培养周期添加额外的培养基：在第3天或第4天，将所需体积的hPSCs培养基（不含Y-27632）直接加入培养皿中。

注意：

选择3天/4天培养周期或7天培养周期取决于hPSCs细胞团的接种密度和所需条件。对于高细胞接种密度，3天/4天周期可以培养出100-200μm大小的细胞团。

每当培养基颜色开始变黄时，需要添加一个培养周期所需的额外培养基。（当水凝胶悬液中的初始细胞接种密度高于1×105个/ mL时，可能需要添加3天或4天的培养周期额外的细胞培养基。

如果在培养周期内加入额外的培养基超过一次，则可能需要定轨摇床10-40rpm以维持细胞悬液。