UbiQuant Kit的预期用途和检测原理说明

泛素/蛋白酶体途径（UPP）：泛素（Ub）对蛋白质的翻译后修饰是一个影响几乎所有细胞功能的关键调控过程。除了Ub在蛋白质降解中的既定作用外，Ub现在还参与了细胞信号传导、DNA损伤反应、蛋白质运输、细胞周期进程、炎症、免疫反应和凋亡调节。泛素化是通过Ub的c端与目标底物上的赖氨酸（Lys）残基的s-氨基之间的异肽连接而发生的(1)。Ub本身有7个赖氨酸残基（K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63），其中每个残基都可以参与进一步的泛素化，生成polyUb链(2)。Ub通过各种赖氨酸形成聚合物的能力似乎是该系统在调节细胞过程中的多功能性的核心。这些聚合物最广泛的特征是通过K48或K63.K48-linked polyUb连接，主要靶向蛋白酶体降解，而K63连接的polyUb似乎调节蛋白质功能、亚细胞定位或蛋白质-蛋白相互作用（3；4）。越来越多的证据表明K11连接的polyUb参与有丝分裂调控（5-7），对这种连锁类型的研究范围有望在未来几年反映K48和K63。随着疾病状态和/或特定的细胞过程，对其他连锁类型的兴趣将呈指数级增长。泛素化是一个可逆的、动态的过程。泛素化机制，由E1、E2和E3等酶组成，在单体和聚合物状态下协同作用于泛素化蛋白质。单链和聚脲链的对应去除（以及polyb链降解）是通过去泛素化酶（DUBs）完成的。

艾美捷UbiQuant Kit用于准确测定细胞和组织中总泛素（poly- + mono-）的浓度。该试剂盒仅用于研究用途，不用于人类或动物的诊断或治疗应用。

UbiQuant ELISA是一种sandwich测定法，可以绝对测量细胞裂解物中的泛素。这种基于平板的测定依赖于使用专有的泛素结合试剂捕获总泛素。酶联抗泛素单克隆（VU-2）抗体产生由酶标仪评估的信号。使用泛素标准曲线可直接测量泛素浓度。

UbiQuant Kit部件：

除非另有说明，否则所有部件应储存在4°-8°C的温度下。

涂层板：提供一（1）个预涂层96孔条形板。这个将板干燥并真空包装。如果未在一个内使用（1） 一个月取下盘子，在-80°C下储存。

条形支架：提供一（1）个空条形板框架。

初级抗体（PA1）：1小瓶在PBS中的200倍mAb VU-2浓缩物含有0.02%NaN3。

标准品（pUb）：2瓶冻干泛素标准品（链+游离）。

小瓶中含有5个mg总泛素。

致敏试剂1（SR1）：2 mL 20倍原液（N.b.含有戊二醛）

增敏试剂2（SR2）：4 mL 8x原液

封闭浓缩液（BC）：12 mL 5X封闭剂

检测抗体（DA1）：1小瓶200X抗小鼠HRP缀合物

塑料板密封：提供四（4）个

检测试剂1（DR1）：鲁米诺试剂0.5 mL小瓶

检测试剂2（DR2）：0.5 mL稳定过氧化物试剂小瓶

UbiQuant Kit文献参考：

1. Pickart, C. M. (2001) Mechanisms underlying ubiquitination Annu Rev Biochem 70, 503-33

2. Xu, P. and Peng, J. (2008) Characterization of polyubiquitin chain structure by middledown spectrometry Anal Biochem 80, 3438-3444

3. Ikeda, F. and Dikic, I. (2008) Atypical ubiquitin chains: new molecular signals. EMBO Rep 9, 536-542

4. Pickart, C. M. and Fushman, D. (2004) Polyubiquitin chains: polymeric protein signals Curr Opin Chem Biol 8, 610-616

5. Garnett, M. J., Mansfeld, J., Godwin, C., Matsusaka, T., Wul, J., Russell, P., Pines, J.,and Venkitaraman, A. R. (2009) UBE2S elongates ubiquitin chains on APC/C substrates to promote mitotic exit Nat Cell Biol 11, 1363-1369

6. Williamson, A., Wickliffe, K. E., Mellone, B. G., Song, L., Karpen, G. H., and Rape, M.(2010) Identification of a physiological E2 module for the human anaphase-promoting complex PNAS 106, 18213-18218

7. Wu, L., Nam, Y. J., Kung, G., Crow, M. T., and Kitsis, R. N. (2010) Induction of the apoptosis inhibitor ARC by Ras in human cancers J Biol Chem 285, 19235-19245