人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）直接分离DNA/topo复合物

人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）：

TopoGEN在拓扑异构酶靶向细胞筛选方面拥有丰富的经验。TopoGEN科学家团队开发并发表了一种检测活细胞中共价拓扑异构酶/基因组DNA复合物的方法（1,2），该方法在该领域得到了广泛应用。该方法称为ICE测定（体内酶复合物），最初需要CsCl梯度来纯化基因组DNA和特异性拓扑异构酶抗体，以检测DNA组分中捕获的拓扑异肽。这种方法虽然强大，但速度慢，劳动强度大，需要大型昂贵的设备。TopoGEN修改了该技术，允许在一步中直接分离DNA/topo复合物，省略了CsCl梯度步骤，并迅速提高了该方法的通量（见下图）。

特异性的关键是使用TopoGEN的高度定向抗体试剂来检测复合物。ICE检测可以在一天半内进行，第二天一早就能看到结果。只要进行适当的控制并使用单特异性抗体试剂，几乎可以在任何细胞或组织系统上进行分析。最后，该分析不再局限于每次运行6个样本（对于超速离心机转子），因此可以实现更大的通量。TopoGEN的新ICE方法快速方便，可用于任何拓扑异构酶靶标（I、II、III）。

高通量体内酶复合物（ICE）测定，用于测量内源性拓扑异构酶/基因组DNA共价复合物。一天的程序不需要CsCl离心步骤。ICE检测试剂盒具有拓扑特异性，因为TopoGEN提供与拓扑/DNA复合物相对应的抗体。

艾美捷人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）（#TopoGEN-TG1020-0）内容：

拓扑异构酶ICE检测试剂盒中包含足够进行24次检测的材料（每次检测需要一个60毫米的培养皿）。

特定抗体为每个试剂盒定义目标酶。

1、喜树碱（随拓扑异构酶I试剂盒提供）：冻干粉；用0.25毫升DMSO重悬以制备10 mM的库存溶液。

2、依托泊苷（随拓扑异构酶IIα和IIβ试剂盒提供）：冻干粉；用0.25毫升DMSO重悬以制备10 mM的库存溶液。

3、用于裂解和DNA制备的A-E缓冲液。

4、每个试剂盒都配有特定的抗体：

无抗体（客户自备）（目录号TG1020-0）

针对人拓扑异构酶I的抗体（目录号TG1020-1）。

针对人拓扑异构酶IIα的抗体（目录号TG1020-2a）

针对拓扑异构酶IIβ的抗体（目录号TG1020-2b）

针对拓扑异构酶IIIα的抗体（目录号TG1020-3a；包含拓扑异构酶I抗体对照）。

针对拓扑异构酶IIIβ的抗体（目录号TG1020-3b；包含拓扑异构酶I抗体对照）。

*由于没有经过验证的拓扑异构酶IIIα或β的毒物，我们包含拓扑异构酶I作为对照。通过包含拓扑异构酶I抗体和喜树碱，您可以确保ICE检测按预期工作。

TG1020-1REF说明：

作为TopoGEN人类拓扑异构酶ICE检测试剂盒的配套对照/参考，TopoGEN提供方便的内部控制，以有效评估和验证结果。该参考文献是从用喜树碱处理的细胞和相应的阴性药物对照制备的基因组DNA。TG1020-1REF产品具有非常高的+药物：无药物基因组DNA（来自Hela细胞）的比例，对应于理想的ICE Delta（或ICE-D）。该参考对照DNA是人类Top1共价复合物ICE检测试剂盒的配套产品。TopoGEN实际上提供了两种基因组DNA参考：一种来自未经处理的人类细胞，另一种来自用喜树碱（30分钟2.5μM）处理的人细胞。如果您以前从未进行过ICE检测，这些REFS将帮助您在自己的实验室中快速有效地建立检测。

样本数据显示了REF标记DNA的特异性（用单克隆抗体检测人Top1的印迹）。产品中包含两种基因组DNA（NEG和POS或阴性CPT和阳性CPT处理的基因组DNA）。还显示了VP16处理的对照（未包括在内），显示该测定对Top1的反应与预期一致。

人拓扑异构酶I ICE检测试剂盒（无抗体）文献参考：

1.  Subramanian, D., Furbee, C. and Muller, M. (2000) ICT Bioassay:  Isolation of In Vivo Complexes of Enzyme to DNA.  DNA Topoisomerase Protocols Vol. II: Enzymology and Drugs.  Humana Press.

2.  Subramainian, D., Kraut, E., Staubus, A., Young, D., and Muller, M.T. (1995) Analysis of Topoisomerase I DNA complexes in patients administered topotecan.  Cancer Research 55:2097-2103.