由于存在污染的拓扑异构酶I,使用依赖于超螺旋DNA弛豫的Top2(人类和细菌)粗提取物的检测可能会变得复杂。污染的核酸酶活性(由于Mg++)会降解或划伤超螺旋底物,从而产生其他复杂情况。这些问题可以通过使用由昆虫Crithidia fasiculata锥虫动质体制备的链状kDNA底物来避免。KDNA是互锁的DNA微环(大多为2.5kb)的集合,形成了高分子量的超大网络。因此,这些网络无法进入琼脂糖凝胶。与Top2(Top2a、Gyrase或TopIV)一起孵育后,微环DNA被有效释放(并脱辅),Top2使DNA参与双链断裂和重组循环。由于尺寸小,脱链的微环迅速进入凝胶。拓扑异构酶I不会发生这种反应。TopoGEN修改了原始凝胶系统,允许使用kDNA对活性进行额外区分。反应产物可以如图所示变化。我们提供标记kDNA,如图所示,以清楚地鉴定反应产物,在这种情况下是脱链的kDNA形式。
艾美捷TopoGEN-脱乙酰kDNA:
编号:TG2020-1
分类:DNA底物
标签:解链kDNA、解链kDNA标记、kDNA标记、拓扑异构酶2测定
解链kDNA质量控制测试:
对于连环kDNA底物,至少90%的DNA将保留在1%琼脂糖凝胶的孔中。
每批kDNA的解链都经过纯化的拓扑异构酶II测试。
该标记在常温下运输,应储存在4°C。
脱乙酰kDNA文献参考:
Miller et al., J. Biol. Chem. 256:9334-9339 (1981)
Muller et al., Biochem. 27:8369-8379, 1988
Muller et al., Nuc. Acid. Res. 17:9499, 1989
艾美捷科技是TopoGEN的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
微信扫码在线客服