纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒-药物筛选实验工具箱

TopoGEN纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒旨在筛选新型的回转酶靶向药物，无论是作为界面毒物（或诱导DNA切割的IFP）还是催化抑制化合物（通过多种机制阻断回转酶作用的CIC）。它是一种易于采用的直接凝胶分析试剂盒。

DNA超螺旋分析：该药物筛选试剂盒基于对提供的松弛质粒DNA底物（pHOT1，pBR322的衍生物）和约2.7 KB的回旋酶超螺旋作用。一个单位的gyrase在37℃下1小时内将超冷200-500ng。该酶通过符号反转模型将负超螺旋引入松弛的pHOT1质粒底物中。能量辅因子（ATP）是完成超螺旋反应所必需的。非EB凝胶是检测旋转酶活性的理想选择，超螺旋和松弛DNA形式之间的出色分辨率证明了这一点。

药物筛选试验。该试剂盒旨在鉴定IFP和CIC（分别为毒物和抑制剂）。典型的IFP（如氟喹诺酮）会诱导双链DNA断裂，而原型CIC只会阻止enyzme作用于松弛的DNA（如新生霉素、一些嵌入剂）。因此，IFP（环丙沙星）将导致线性DNA产物的形成，而CIC将阻断超螺旋活性。使用此套件可以很容易地检测到这些事件。

艾美捷纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒：

SKU：TG2001GKIT  

类别：药物筛查试剂盒

标签：DNA旋转酶，药物筛选，EC DNA旋转酶

纯化的大肠杆菌DNA旋转酶药物筛选试剂盒包含了纯化的细菌（大肠杆菌）DNA旋转酶，纯度达到均一性（基于SDS-PAGE的测定结果超过98%）。旋转酶是从过表达菌株中制备的，并以A2B2复合体形式提供的纯化完整酶。酶的单位浓度根据试剂盒附带的质量控制数据提供。它还储存在稳定化缓冲液中[50 mM Tris-Cl pH 7.5，100 mM KCl，2 mM二硫苏糖醇，1 mM EDTA，50%甘油]。包括底物解链DNA（质粒pHOT1）。

EC DNA旋转酶测定药物试剂盒内容（100次测定）：

1. 解链pHOT1 DNA（50微克）

2. 超螺旋pHOT1 DNA（25微升，含凝胶上样缓冲液）

3. 线性化pHOT1 DNA（25微升，含凝胶上样缓冲液）

4. 5倍旋转酶测定缓冲液（0.6毫升）

5. 稀释缓冲液（0.6毫升）

6. 10倍凝胶上样缓冲液（0.3毫升）

7. 10倍蛋白酶K（0.5毫升）

8. 10% SDS（0.3毫升）。

9. 纯化DNA旋转酶（100单位）

10. 环丙沙星10微克/毫升（50微升）

DNA旋转酶质量控制：

对我们纯化的酶进行QC测试：

1. 通过测定线性质粒DNA和线性pUC19 DNA的形成来进行核酸酶污染测试。在10 mM MgCl2存在下，对1微克的连接kDNA或超螺旋pUC19 DNA进行孵化（37°C下4小时）。在这些条件下没有产生线性DNA或分解产物。

2. A和B亚基纯度超过98%，基于SDS-PAGE，并认证为内切核酸酶自由。

3. 注意：在高输入水平的DNA旋转酶下，可能会因为自发中止的反应而检测到少量线性DNA。这很正常，实际上可以作为线性DNA的内部标记。