TopoGEN 人拓扑异构酶IIα酶的纯化、特性及其在分子生物学中的应用

我们使用TopoGEN工作人员开发的专有方法纯化人拓扑异构酶IIα（Top2a）。纯化的酶完全没有污染和核酸酶。它分两步改变一种独特拓扑异构体的连接数，SDS-PAGE上检测到的主要多肽为170 kDa。

作为TopoGEN在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐TopoGEN热销产品人拓扑异构酶IIα酶。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

人拓扑异构酶IIα酶：

SKU：TG2000H

类别：拓扑异构酶

标签：人类top2、top2a、拓扑异构酶2α

纯化的人拓扑异构酶II Alpha（Top2a）过表达并纯化至均一性，SDS-PAGE上显示为单一条带。拓扑异构酶II高度纯化，无核酸酶污染。

人类拓扑异构酶II质量控制测试

核酸酶污染：通过测试线性kDNA和线性质粒DNA的形成来进行检测。在37°C下（在top2a实验条件下，有或无ATP）孵育1微克的连环KDNA或超螺旋pUC19 DNA 4小时。

通过在人类拓扑异构酶II Alpha活性被抑制的条件下检测超螺旋DNA的松弛来评估与拓扑异构酶I的交叉污染。过量的纯化酶与pRYG DNA在无ATP（有和无Mg++）的情况下在37°C下孵育2小时。在这些条件下，不得检测到pRYG超螺旋DNA的松弛。

当SDS-PAGE凝胶过载纯化蛋白时，可以看到一个170 kDa的主要条带。最终分数中没有180 kDa的拓扑异构酶II形式。（蛋白质浓度因批次而异，但通常在每毫升5-50微克的范围内。）Top2a可以提供2-10单位/微升（1单位将在37°C下30分钟内解连环0.2微克的KDNA）。请注意，单位定义基于首选的DNA底物，kDNA（kinetoplast DNA）。我们建议使用kDNA底物与此酶，因为质粒DNA松弛实验的敏感性远不如kDNA。活性是基于kDNA解连环（而不是质粒DNA松弛）认证的。

人类拓扑异构酶II Alpha酶的最终分数从FPLC柱中以以下缓冲液洗脱：10%甘油，50 mM Tris（pH 7.7），1 mM EDTA和EGTA，650 mM NaCl。

人类拓扑异构酶II Alpha实验条件和性能质量控制

解连环实验使用kinetoplast DNA（KDNA）底物在最终体积为20-30微升的拓扑异构酶II反应缓冲液中进行（50 mM Tris-Cl，pH 8.0，120 mM KCl，10 mM MgCl2。0.5 mM ATP，0.5 mM二硫苏糖醇），含0.2微克KDNA。反应用5微升（每20微升反应体积）的停止缓冲液（5%十二烷基硫酸钠，0.0025%溴酚蓝，25%甘油）终止。反应产物在含有0.5微克/毫升乙酰胺的1%琼脂糖凝胶上分析。在凝胶运行时，可以使用手持紫外线光源轻松监测2.5 kb DNA小环解连环产物的分离。

Top2a在干冰上运输，应储存在-70°C。我们还建议在第一次解冻后分装酶（反复的冻融会导致活性损失）；酶活性稳定1-2天（不超过）。

文献：

Muller et al., Biochemistry 27: 8369–8379 (1988) Spitzner and Muller, Nuc. Acid. Res. 16: 5533–5556 (1988)

美国TopoGEN创立于1991年, 专业提供拓扑异构酶试剂和分析试剂盒，他们的药物筛选试剂盒可用于鉴定拓扑异构酶靶向分子，用于癌症化疗和抗菌应用。TopoGEN还可提供检测和定量原核（DNA回旋酶，拓扑异构酶IV）和真核拓扑异构酶（拓扑异构酶I，IIa，IIb，III）的检测试剂盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶标、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抗体和试剂盒补充试剂，DNA修复的相关系列产品也是他们产品的特色产品。  

作为TopoGEN在中国的代理商，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TopoGEN以及客户订制化服务。