TopoGEN 拓扑异构酶II药物筛选试剂盒（25微克SC DNA）

这是一种基于切割的检测试剂盒，可以揭示特定试剂是否拮抗拓扑异构酶II的作用或影响切割/再连接周期。使用试剂盒中提供的试剂（缓冲液、DNA、对照抑制剂）在微量离心管中组装反应。

作为TopoGEN在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐TopoGEN热销产品拓扑异构酶II药物筛选试剂盒（25微克SC DNA）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

拓扑异构酶II药物筛选试剂盒（25微克SC DNA）：

SKU：TG1009

分类：药物筛选试剂盒

标签：1009, 药物筛选，phot1, 超螺旋DNA底物，TG1009, Top2药物筛选试剂盒，拓扑异构酶2药物筛选试剂盒

这是一个基于切割检测的试剂盒，可以揭示特定药物是否拮抗拓扑异构酶II的作用或影响切割/连接循环。反应在微量离心管中使用试剂盒提供的试剂（缓冲液、DNA、对照抑制剂）组装。该试剂盒设计用于与TopoGEN提供的纯化拓扑异构酶II一起使用（目录号中包含酶的试剂盒可供购买）。加入酶后，反应在37°C下孵育15-30分钟，并通过添加SDS终止。

一个典型的反应：

H2O：体积可变，补足体积（本例中为20微升）

10X测定缓冲液 2微升（由缓冲液A和B新鲜配制，详见试剂盒详情）

DNA（超螺旋）1微升

测试化合物或对照抑制剂：可变（受溶剂效应限制，如对照中所述）

**纯化拓扑异构酶II：4-6单位（酶单独出售）

在37°C下孵育15-30分钟

加入2微升SDS；用蛋白酶K（50微克/毫升）消化

加入0.1体积样品加载染料（试剂盒提供）

加载凝胶：1%琼脂糖含有0.5微克/毫升的乙锭，以及试剂盒中包含的标记DNA。

图示中每个泳道的反应是使用TopoGEN提供的酶和1微升DNA（0.25微克形式I pHOT-1，如每个试剂盒中提供的）进行的。反应产物在1%琼脂糖凝胶上分析；电泳缓冲液含有0.5微克/毫升的乙锭。然后在照片记录前用蒸馏水去染色。切割复合物（线性DNA种类）的形成清晰可见。此外，在所有含有VM26的反应中，超螺旋DNA底物（形式I pRYG DNA）的松弛被抑制。试剂盒包含标记DNA、VM-26对照抑制剂、所有缓冲液和使用试剂筛选拓扑异构酶II抑制剂的完整说明。手册规定了凝胶电泳的条件以解决所有DNA形式；将得到出版质量的凝胶。

**切割反应需要比松弛测定更多的拓扑异构酶II，因为前者是酶的计量反应。例如，上述反应含有4单位的酶（单位由解链活性定义）。

拓扑异构酶II抑制剂已被证明具有有效的抗菌、抗病毒和抗癌活性。识别拓扑异构酶II抑制剂和拮抗剂需要使用纯化酶的可行生化测定。拓扑异构酶II药物筛选试剂盒包含了筛选影响酶活性的试剂。为了给客户提供最大的灵活性，一些试剂盒包括人类Top2a，或者可以单独购买。这个试剂盒将允许检测两类拓扑异构酶抑制剂：那些刺激切割复合物形成的和那些拮抗拓扑异构酶II对DNA作用的。试剂盒中还包括有关抑制数据设计和解释的详细文件。已知的抑制剂作为对照物被包括在内。这个测定中包含的DNA底物（pHOT1）非常适合这些研究，因为它包含一个单一的、高亲和力的拓扑异构酶II切割位点（注意拓扑异构酶II不是特别序列特异性）。测定系统基于评估DNA切割产物的形成，这些产物可能是缺口的、开环DNA或线性DNA。然后按照试剂盒中的描述，通过乙锭凝胶电泳来解决这些产物。

拓扑异构酶II药物筛选试剂盒内容（以100次测定试剂盒大小为代表）：

100单位人类Top2a（仅包含目录号TG10091A）

超螺旋DNA [pHOT1 DNA] 25微克

线性pHOT1 DNA标记

10X拓扑异构酶II测定缓冲液组分：

*为了提高稳定性，10x拓扑异构酶II测定缓冲液作为两个组分提供：缓冲液A（不含ATP）和缓冲液B（含ATP）。每次通过混合缓冲液A和B新鲜配制完整的10x测定缓冲液。

十二烷基硫酸钠（10%）

10X凝胶加载缓冲液（溴酚蓝，甘油）

对照抑制剂，依托泊苷

蛋白酶K

详细说明书

如果试剂盒与酶一起购买，则该试剂盒在常温下运输或干冰上运输。酶应存放在-70°C。DNA应存放在4°C。收到后测定缓冲液组分应存放在-20°C。VP16可以存放在常温下。

文献参考：

Sudan, S., & Rupasinghe, H. V. (2014). Flavonoid-Enriched Apple Fraction AF4 Induces Cell Cycle Arrest, DNA Topoisomerase II Inhibition, and Apoptosis in Human Liver Cancer HepG2 Cells. Nutrition and cancer, ahead-of-print (2014): 1-10.  doi: 10.1080/01635581.2014.951733

Cheng MH, Yang YC, Wong YH, Chen TR, Lee CY, Yang CC, Chen SH, Yang IN, Yang YS, Huang HS, Yang CY, Huang MS, Chiu HF: B1, a novel topoisomerase II inhibitor, induces apoptosis and cell cycle G1 arrest in lung adenocarcinoma A549 cells.  Anti-Cancer Drugs 2012, 23(2): 191-199.  doi: 10.1097/CAD.0b013e32834cd277

Shi W, Marcus SL, Lowary TL: Cytotoxicity and topoisomerase I/II inhibition of glycosylated 2-phenyl-indoles, 2-phenyl-benzo[b]thiophenes and 2-phenyl-benzy[b]furans.  Bioorganic and Medicinal Chemistry 2010.  doi: 10.1016/j.bmc.2010.10.054

Gong Y, Firestone GL, Bjeldanes LF: 3,3′-Diindolylmethane is a novel topoisomerase IIa catalytic inhibitor that induces S-phase retardation and mitotic delay in human hepatoma HepG2 cells.  Molecular Pharmacology 2006, 69(4): 1320-1327.

美国TopoGEN创立于1991年, 专业提供拓扑异构酶试剂和分析试剂盒，他们的药物筛选试剂盒可用于鉴定拓扑异构酶靶向分子，用于癌症化疗和抗菌应用。TopoGEN还可提供检测和定量原核（DNA回旋酶，拓扑异构酶IV）和真核拓扑异构酶（拓扑异构酶I，IIa，IIb，III）的检测试剂盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶标、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抗体和试剂盒补充试剂，DNA修复的相关系列产品也是他们产品的特色产品。  

作为TopoGEN在中国的代理商，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TopoGEN以及客户订制化服务。