Calbiotech-睾酮ELISA试剂盒，测定程序和样本的收集处理

睾酮（17b-羟基雄-4-烯-3-酮）是一种C19类固醇，在C-4和C-5之间有一个不饱和键，C-3上有一个酮基，C-17上的\61538]位有一个羟基。这种类固醇激素的分子量为288.4。睾酮是分泌到血液中的最重要的雄激素。在男性中，睾酮主要由睾丸的间质细胞分泌；在雌性中，约50%的循环睾酮来自雄烯二酮的外周转化，约25%来自卵巢，约25%来源于肾上腺。睾酮负责男性第二性征的发展，其测量有助于评估性腺功能减退状态。在女性中，高水平的睾酮通常出现在多毛症和男性化、多囊卵巢、卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤和肾上腺增生中。在男性中，高水平的睾丸激素与垂体下叶单位疾病、睾丸肿瘤、先天性肾上腺皮质增生和前列腺癌症有关。以下疾病的患者睾酮水平低：垂体功能减退症、Klinefelter综合征、睾丸女性化、兰花切除术和隐睾症、酶缺陷和一些自身免疫性疾病。睾酮EIA试剂盒专为测量人血清中的总睾酮而设计。

Calbiotech-睾酮ELISA试剂盒用于定量测量人体血清或血浆中的睾酮。

艾美捷Calbiotech-睾酮ELISA试剂盒（TE373S）检测原理：

睾丸激素检测试剂盒是一种固相竞争性ELISA。将样品、工作睾酮-HRP偶联物和抗睾酮生物素溶液加入到涂有链霉抗生物素蛋白的孔中。患者血清中的睾酮与睾酮酶（HRP）结合物竞争结合位点。未结合的睾酮和睾酮酶结合物被洗涤缓冲液洗掉。添加底物后，颜色的强度与样品中睾酮的浓度成反比。绘制了一条标准曲线，将颜色强度与睾酮浓度联系起来。

样本收集与处理：

1. 收集血液样本后立即分离出血清。

2. 通常，样本可以在冰箱中（2-8°C）冷藏存储5天。如果存储时间超过5天，则应冷冻在（-20°C）下，最长可存储一个月。

3. 避免多次冻融循环。

4. 测定前，应将冷冻血清完全解冻并混合均匀。

5. 不要使用明显脂血的样本。

6. 请注意：含有亚硝酸盐的样本不应在测定中使用。

试剂准备：

1. 20X酶结合物：用测定稀释液以1:20的比例制备1X工作溶液（例如，向1.9ml的测定稀释液中加入0.1ml的睾酮酶结合物浓缩液）。

2. 通过向瓶中加入内容物（25ml，20X）和475ml的蒸馏水或去离子水，制备1X洗涤缓冲液。存放在室温（20-25°C）。

3. 使用前，所有试剂应放置至室温（20-25°C）。

测定程序：

在进行测定之前，将所有试剂放置至室温（20-25°C）。

1. 向指定孔中移液50微升的标准品、对照品或样本。

2. 向每个孔中加入100微升的工作睾酮-酶结合物试剂（参见试剂准备部分）。

3. 向每个孔中加入50微升的生物素试剂。轻轻旋转微孔板20-30秒以混合试剂。

4. 覆盖板子，并在室温下孵育60分钟。

5. 清除所有孔中的液体。用300微升的1X洗涤缓冲液洗孔三次（参见试剂准备部分）。用吸水纸拍干。

6. 向每个孔中加入100微升的TMB底物试剂。

7. 覆盖板子，在室温下孵育三十（30）分钟。

8. 向每个孔中加入50微升的终止溶液，并轻轻混合15-20秒。

文献参考：

1. Chen, A., Bookstein, J.J., Meldrum, D.R., Diagnosis of a testosterone-secreting adrenal adenoma byselective venous catheterization. Fertil. Steril., 1991; 55: 1202-1203.

2. Granoff, A.B. and Abraham, G.E., Peripheral and adrenal venous levels of steroids in a patient withvirilizing adrenal adenoma. Obstet. Gynecol., 1979; 53:111-115.

3. Bricaire, C., Raynaud, A., Benotmane, A., et al., Selective venous catheterization in the evaluation ofhyperandrogenism. J. Endocrinol Invest., 1991; 14: 949-956.

4. Heinonen, P.K., Androgen production by epithelial ovarian tumours in post-menopausal women.Maturitas, 1991; 13: 117-117-122

5. Tietz, N.W. ed., Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd Edition, W.B. Saunders, Co., Philadelphia,1995: 578-580

6. USA Center for Disease Control/National Institute of Health Manual, “Biosafety in Microbiological andBiomedical Laboratories"”847. ICN Guide to Endocrine Testing. Diagnostic Division, ICN Biomedicals, Inc. pp. 2:33-35; 3:4-6.

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