胶原蛋白是细胞外基质的主要成分之一。胶原蛋白生产的失调可能导致如纤维化(胶原蛋白过多)或骨关节炎(胶原蛋白过少)等病理状态。因此,在许多与疾病相关的研究中,测量胶原蛋白的生成是重要的。QuickZyme胶原蛋白检测试剂基于染料Sirius Red与胶原蛋白的结合。染料结合后,胶原蛋白-染料复合物沉淀,形成一个有色的颗粒。这种颜色可以在碱性溶液中释放。
该检测可以测量各种类型的纤维胶原蛋白。z丰富的胶原蛋白类型是胶原蛋白类型I(皮肤、骨骼、血管、结缔组织)、类型II(软骨)和类型III(皮肤、骨骼、结缔组织)。该检测对胶原蛋白具有特异性。在50°C加热后信号会丧失,因为该检测不识别变性的胶原蛋白(明胶)。
该检测可用于分析可溶性胶原蛋白或通过乙酸单独或与胃蛋白酶结合溶解的胶原蛋白。该检测适用于在细胞培养基和细胞提取物中进行胶原蛋白分析。该检测至少在10%的血清浓度下不受影响。
艾美捷QuickZyme Biosciences可溶性胶原蛋白测定原理:
QuickZyme Biosciences可溶性胶原蛋白测定试剂盒组成:
板组和平衡板组,每组包含:
1个检测微板 96孔V型聚丙烯微板。根据样本数量,板子可以切割使用部分。
1个读取微板 96孔透明聚苯乙烯平底微板。此板用于在微板阅读器中测量540纳米处的吸光度;它也可以作为离心过程中的检测板的支架。
1个粘合板封条
胶原蛋白标准溶液 大鼠尾部I型胶原蛋白,20 mM乙酸中浓度为714微克/毫升。该溶液可用于多条标准线。
Sarstedt 1.5毫升管(含500微升)
染料溶液 含有Sirius Red染料的无菌溶液。
15毫升塑料瓶(含8毫升)
稀释缓冲液 用于空白和标准/样本稀释的无菌缓冲液。
30毫升塑料瓶(含20毫升)
洗涤缓冲液 含有洗涤剂(易燃)的缓冲液。
120毫升瓶(含80毫升)
检测溶液 无菌碱性缓冲液。
30毫升瓶(含18毫升)
开启的试剂盒/重组试剂的储存条件:
溶于20 mM乙酸中的胶原蛋白标准品:在4°C下储存,有效期z长1个月。
染料溶液:在4°C下储存,有效期z长1个月。
稀释缓冲液:在-20°C下储存,有效期z长6个月。
洗涤缓冲液:在-20°C下储存,有效期z长6个月。
检测溶液:可在4°C或室温下储存,有效期z长1个月
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