Cytoskeleton热销SiR-Actin 试剂盒常见问题解答

SiR-肌动蛋白基于F-肌动蛋白结合天然产物茉莉素内酯。SiR-肌动蛋白具有荧光、细胞渗透性和对 F-肌动蛋白的高度特异性。Sir-肌动蛋白染色内源性 F-肌动蛋白，无需遗传操作或过度表达。它在远红光中的发射最大限度地减少了光毒性和样品自发荧光。SiR-肌动蛋白与GFP和/或m-樱桃荧光蛋白相容。它可以使用标准 Cy5 滤光片集进行成像。SiR-肌动蛋白可用于活细胞和组织中的宽场、共聚焦、SIM 或 STED 成像。探针数量允许 50 – 200 次染色实验。   

作为Cytoskeleton全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品SiR-Actin 试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。    

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。

SiR-Actin 试剂盒常见问题：

问题 1.什么是STED显微镜，它是如何工作的？

回答 1.STED 显微镜代表 受激发射消耗显微镜。它是一种超分辨率显微镜，可以捕获比受光衍射限制的传统光学显微镜更高分辨率的图像。STED使用2个激光脉冲，一个是激发荧光团的激发脉冲，使其发出荧光。第二个脉冲称为STED脉冲，通过在中心焦点周围的区域进行受激发射来去激发荧光团，该区域未去激发，因此继续发出荧光。这是通过将STED脉冲聚焦成环形（即所谓的甜甜圈）来实现的，其中中心焦点没有STED激光脉冲，从而为荧光区域赋予高分辨率（图1;有关STED显微镜的更多详细信息，请参见参考文献1）。 

问题 2.这些探头的滤光片组是什么？

回答 2.SiR肌动蛋白和微管蛋白探针使用标准Cy5过滤器可视化。最佳激发波长为650 nm，发射波长为670 nm。我们建议使用激发波长为 630 + 20 nm 、发射波长为 680 + 20 nm 的滤光片（图 2）。  

问题 3.为什么与其他荧光基团相比，SiR探针的背景较低？

回答 3.SiR探头被近红外/远红光谱范围内的光激发并发射光，从而避免使用通常自发荧光的较短波长，例如蓝光和绿光，从而导致更高的背景信号。SiR偶联探针具有两种物理状态：1.非荧光闭合关闭状态（螺内酯）和2.一个开放的、高度荧光的导通状态（两性离子）。探针与其配体靶标的结合有利于高荧光开放状态，而游离未结合探针处于封闭的非荧光状态（图3）。荧光扩增是从未结合状态到结合状态的100倍。这导致了高度灵敏的生物传感器，其中大多数荧光仅以结合状态发生（参见参考文献3和4）。  

图1

图2

图3

SiR-Actin 试剂盒相关文献：

1. Hell S.W. and Wichmann J. 1994. Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated-emission-depletion fluorescence microscopy. Opt. Lett. 19, 780-782. 

2. D’Este E. et al. 2015. STED nanoscopy reveals the ubiquity of subcortical cytoskeleton periodicity in living neurons. Cell Rep. 10, 1246-1251. 

3. Lukinavicius G. et al. 2013. A near-infrared fluorophore for live-cell super-resolution microscopy of cellular proteins. Nat. Chem. 5, 132-139. 

4. Lukinavicius G. et al. 2014. Fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton.Nature Methods. 11, 731-733.    

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。