SiaFind广谱键Lectenz检测试剂盒特异性染色方案

胰腺导管腺癌（PDAC）是一种极具侵袭性的癌症，5年生存率仅为约11%。其预后差的主要原因是晚期诊断和有限的治疗选择。

尽管免疫检查点阻断（ICB）等免疫疗法在多种癌症中提高了患者生存率，但在PDAC中效果不佳，主要由于低突变负荷和多种免疫抑制机制。

CAF是PDAC肿瘤微环境（TME）中的关键成分，占总肿瘤质量的比例高达80%，并富含细胞外基质和特殊结缔组织细胞。CAF通过分泌多种因子和细胞间相互作用，对免疫系统产生显著影响。 唾液酸是一种糖链修饰，通过Siglec受体在免疫细胞上发挥免疫检查点作用。唾液酸的过表达与多种癌症的免疫逃避相关。

Kelly等人就CAF通过唾液酸-Siglec相互作用调节巨噬细胞分化的机制发表了在线研究《Pancreatic cancer-associated fibroblasts modulate macrophage differentiation via sialic acid-Siglec interactions》

方法

实验材料与方法

细胞系：文章使用了多种CAF细胞系（如M1CAF、T1CAF、PS-1CAF）和肿瘤细胞系（如BxPC3、MiaPaca-2）。

免疫组织化学（IHC）：利用Lectenz品牌的唾液酸特异性探针（pan-Lectenz）对PDAC患者组织样本进行染色，以检测唾液酸表达。

流式细胞术：使用Lectenz探针及多种Siglec-Fc融合蛋白，分析CAF细胞系和肿瘤细胞系上唾液酸的表达及其与Siglec受体的相互作用。

共培养实验：将CAF细胞系与单核细胞共培养，观察单核细胞向巨噬细胞的分化情况。

基因敲除与抑制实验：利用CRISPR-Cas9技术敲除特定基因（如CMAS、ST3GAL4、Siglec-9），或使用唾液酸转移酶抑制剂（SI），研究唾液酸在CAF介导的免疫调节中的作用。

实验

唾液酸在CAF中的表达与功能

组织染色：通过IHC染色发现，PDAC组织中CAF区域的唾液酸表达显著高于肿瘤细胞区域。

转录组分析：利用公共数据库和单细胞RNA测序（scRNA-Seq）数据，发现CAF高表达与唾液酸合成相关的基因，特别是ST3GAL4酶。

功能验证：通过抑制CAF上的唾液酸合成（使用SI或CMAS敲除），发现唾液酸在CAF介导的巨噬细胞分化中起关键作用。

CAF与巨噬细胞的相互作用

共培养实验：CAF细胞系与单核细胞共培养后，单核细胞显著分化为具有免疫抑制功能的TAM样巨噬细胞。

Siglec受体作用：发现CAF上的唾液酸作为配体，与巨噬细胞上的Siglec-7、Siglec-9、Siglec-10和Siglec-15受体相互作用，促进巨噬细胞的免疫抑制分化。

关键酶的作用：通过敲除CAF中的ST3GAL4酶或巨噬细胞中的Siglec-9受体，进一步验证了唾液酸-Siglec轴在CAF介导的巨噬细胞分化中的核心作用。

在本研究中，Lectenz的SiaFind广谱键Lectenz检测试剂盒起到了关键性作用：

特异性染色：艾美捷SiaFind广谱键Lectenz检测试剂盒/SiaFind Pan-Specific Lectenz Kit(SK0501)被用于检测PDAC患者组织样本中的唾液酸表达，显示出在CAF区域的高表达水平，这为后续实验提供了关键线索。

流式细胞术分析：在流式细胞术中，Lectenz探针也被用于检测CAF细胞系和肿瘤细胞系表面唾液酸的表达情况，以及这些细胞与Siglec受体的相互作用，为理解CAF的免疫调节机制提供了有力工具。