Sia Rich a2,3-特异性色谱柱亲和色谱分离指南

SiaFind α2,3-特异性Lectenz 是一种唾液酸亲和试剂，用于检测、分离和富集终止于Neu5Acα2,3Gal的唾液聚糖，常见于糖缀合物（糖蛋白、糖脂和低聚或多糖）。它对聚糖上的α2，3连接的唾液酸具有高亲和力和特异性。但是，它不绑定有效地与支链唾液酸化表位如唾液酸化Lewis A/X结合。该试剂可用作各种应用。

SiaRich α2,3-特异性柱（Cat#SC2301）是SiaFind α2，3-特异性Lectenz 偶联柱，用于通过亲和色谱法快速富集和纯化α2，3连接的唾液聚糖结合物。特异性结合的唾液酸化糖蛋白或其他生物分子可以竞争性或非竞争性地从柱洗脱。

对于HEK细胞中表达的Robo1-GFP，使用SiaRich α2,3-特异性色谱柱，富集了α2,3-连接的唾液酸化糖型。使用生物素标记的SiaFind α2,3-特异性Lectenz 作为主要探针，通过Western印迹法检测确认了富集的效果。

Sia Rich a2,3-特异性色谱柱形式和存储：

SiaRich 亲和柱已预包装并准备好FPLC。它在SiaFind 结合缓冲液3（SBB3；25mM EPPS，110mM NaCl，pH 7.5）中提供。自生产之日起，它在4°C下稳定三个月。切勿冻结柱。

所有5X缓冲液应使用超纯水稀释至1X。例如，为了制备250 mL，将50 mL任何5X缓冲液加入200 mL水中，并通过倒置混合。所有缓冲器可储存在4至25°C的温度下。

如何使用SiaRich α2,3-Specific Column进行亲和色谱分离？

1. 准备缓冲液：使用5倍浓缩的结合缓冲液（产品编号BA0103）制备1X SiaFind 结合缓冲液3，以及使用5倍浓缩的再生缓冲液（产品编号BA0301）制备1X SiaFind 再生缓冲液1。

2. 平衡柱：以1 mL/min的速度用5 mL的SBB3平衡柱。

3. 注射样品：以0.5 mL/min的速度注射待分析物。首次运行推荐使用400 μg的胎蛋白（fetuin）溶于1 mL SBB3。

4. 洗脱柱：以1 mL/min的速度用10 mL的SBB3洗脱柱。

5. 洗脱结合的分析物：非竞争性地用5 mL的SRB1洗脱，或竞争性地用5 mL的50 mM 3'-唾液乳糖（溶于SBB3）洗脱，速度为1 mL/min。

注意：3'-唾液乳糖中的杂质可能导致280 nm处显著吸收，人为增加洗脱峰。

6. 再生柱：用5 mL的SRB1以1 mL/min的速度再生柱。

7. 重复步骤1：为下一次运行或短期存储柱子做准备。

8. 长期存储：可选步骤，用含有20%乙醇的5 mL SBB3（5X SBB3:H2O:乙醇的1:3:1混合物）填充柱子。

9. 柱子的重复使用：直到洗脱峰中包含的胎蛋白少于注射的400 μg时，柱子可以重复使用。

10. 注意事项：

对于复杂样品（如细胞提取物），可能需要以更慢的流速注射以最大化结合。

浓缩样品必须在SBB3中充分稀释以确保与柱子的最佳结合。

进行下游分析，如使用SiaFind α2,3-Specific Lectenz 进行西方印迹（Western Blot），以确认α2,3-连接的唾液酸糖缀合物的富集。