Rossix/艾美捷凝血酶原(FII)活性检测的显色试剂盒测量原理

凝血酶原（FII）是一种依赖维生素K的单链糖蛋白，分子量为72 kDa，当存在FXa、FVa、钙离子和磷脂的情况下，由FXa激活为凝血酶（FIIa）。

凝血酶原(FII)活性检测的显色试剂盒用于定量测定血浆和含有凝血酶原（FII）的浓缩物中凝血酶原（FII）的功能活性。该方法适用于柠檬酸盐或EDTA采集的血浆。

艾美捷Rossix凝血酶原(FII)活性检测的显色试剂盒（Ros-200040）测量原理：

FII的功能活性通过一种显色凝血酶原酶方法进行测定，其中人源FII在牛FV、钙离子和磷脂的存在下，由人源FXa激活为凝血酶（FIIa）。通过对显色凝血酶原酶底物的水解来确定形成的FIIa的量。样品的FII活性与血浆或FII浓缩物标准进行比较，FII的效力以国际单位（IU）表示。凝血酶原酶复合物对γ-羧化敏感，因此与蛇毒基于凝血酶原的方法不同，该方法不会激活α-羧基化的FII。

凝血酶原(FII)活性检测的显色试剂盒成分：

活化剂试剂，3.0 mL（4支）- REF 2010

活化剂试剂含有冻干的人源FXa、牛FVa、CaCl2和磷脂。每支试剂足够进行25次测试。

FIIa底物，6 mL（1支）- REF 2080

显色凝血酶（FIIa）底物（H-D-Phe-Pip-Arg- pNA）的液体溶液，浓度为2.0 mmol/L。

FII稀释缓冲液，储备溶液，20 mL（1支）- REF 2050

稀释缓冲液的液体储备溶液。

准备工作：

活化剂试剂

用3.0 mL水重溶。在20-25°C下静置5分钟，并进行间歇性轻轻混匀，完全重溶。

FIIa底物，6 mL

可直接使用。

FII稀释缓冲液，储备溶液，20 mL

用水稀释1 + 9，得到0.05 mol/L Tris-HCl缓冲工作溶液，pH值为7.3（20°C），含有1%牛血清白蛋白。

注意：所有重溶和稀释应使用至少符合NCCLS II型水3或欧洲药典注射用水的质量的水进行。

存储和稳定性：

密封的试剂在2-8°C下稳定，直到标签上的失效日期。注意避免试剂受微生物污染。

- 重溶后的活化剂试剂：

重溶后在2-8°C下稳定8小时，在20-25°C下稳定2小时，在37°C下稳定2小时。

- 显色凝血酶（FIIa）底物：

打开的瓶子在2-8°C下稳定1个月。

- FII稀释缓冲液储备溶液：

打开的瓶子在2-8°C下稳定1个月。

缓冲工作溶液应在制备当天使用。

所需但未提供的材料：

- 去离子水，NCCLS II型水或欧洲药典注射用水或更高质量的水。

- 人血浆或FII浓缩物，效力与世界卫生组织（WHO）FII活性国际标准相比。

- 柠檬酸，2%（用于终点法）

- 校准的移液管

- 光度计，405 nm（终点法还需490 nm）

- 37°C恒温培养箱

- 塑料试管和涡旋混匀器

- 计时器

注意：

制备活化剂试剂时使用的每个供体单位均经过FDA批准的方法进行了乙型肝炎表面抗原和HIV 1和2以及丙型肝炎抗体的检测，结果为阴性。然而，由于没有任何测试可以完全排除这些血液传播疾病的存在，因此在处理和处置这种人源试剂时应谨慎。

- 避免与皮肤和眼睛接触。

- 不要排入下水道。

- 穿适当的防护服。

艾美捷科技是Rossix的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。